文献类型： 中文期刊

作者： 俞机敏 ¹ ; 刘宏扬 ² ; 刘云飞 ² ; 王尚辉 ² ; 宋厚辉 ¹ ; 张朝霞 ² ; 翁长江 ² ;

作者机构： 1.浙江农林大学动物科技学院动物医学院

2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/基础免疫创新团队

关键词： 猪伪狂犬病病毒;单克隆抗体;gE蛋白;表位鉴定

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年 47 卷 008 期

页码： 832-838

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备猪伪狂犬病病毒(PRV)gE糖蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究将PRV JM株gE蛋白主要抗原表位区域(aa52~aa238)的基因序列经密码子优化后由公司合成后克隆于pET-32a载体中构建重组表达质粒pET-32a-gE,经原核表达及纯化获得重组gE蛋白(rgE),采用SDS-PAGE鉴定rgE的表达及纯化效果,并经BCA法测定rgE的浓度.将其免疫BALB/c小鼠.取3次免疫小鼠的脾脏制备脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合.通过ELISA筛选杂交瘤细胞株,经western blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定MAb的反应性,利用MAb亚类鉴定试剂盒检测其重链和轻链类型.以截短的gE合成多肽作为抗原,采用间接ELISA方法鉴定MAb识别的抗原表位,并利用MAb通过western blot和IFA鉴定PRV野毒株JM及gE基因缺失株PRV JMΔgE/TK中gE蛋白的表达水平.结果显示,经间接ELISA方法筛选到1株稳定分泌gE蛋白的单克隆细胞株,命名为4C6B.Western blot和IFA均表明本研究筛选的MAb能够特异性识别PRV感染PK-15细胞中表达的gE蛋白;亚类鉴定结果显示MAb重链为IgM型,轻链为κ链.间接ELISA结果显示MAb能够识别gE蛋白中的一个线性B细胞表位131ACHPDLVLGRACVPEAPEMG150.利用制备的MAb腹水进行PRV野毒和gE基因缺失株的鉴定,结果显示该MAb能够有效鉴别PRV JM野毒株与gE缺失株.本研究制备的PRV gE蛋白的4C6B MAb可以用于特异性鉴别PRV JM野毒株和gE基因缺失株,同时也可以为PRV检测方法的建立、PRV基因缺失疫苗的构建以及gE蛋白的生物学功能研究提供生物材料.