文献类型： 中文期刊

作者： 王晓 ¹ ; 刘传霞 ¹ ; 鲍苗菲 ¹ ; 李雪雯 ¹ ; 李婷婷 ¹ ; 陈欣 ¹ ; 郑君 ¹ ; 翁长江 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室基础免疫创新团队

关键词： 非洲猪瘟病毒;p34蛋白;原核表达;单克隆抗体

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2024 年 32 卷 006 期

页码： 176-181

摘要： 非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染家猪或野猪而引起的一种高度接触性传染病。ASFV编码超过150种蛋白，其中大多数蛋白的功能有待鉴定。本研究旨在表达ASFV p34蛋白，并制备其单克隆抗体，为p34蛋白的功能研究提供材料。首先构建了重组原核表达质粒pET-21a-p34，将质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，经IPTG诱导后，通过SDS-PAGE以及Western blot鉴定，结果显示，得到了可溶性表达的His-p34重组蛋白。将纯化的蛋白免疫小鼠，然后通过细胞融合以及ELISA筛选，获得了1株能够稳定分泌p34蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经Western blot鉴定，该抗体能够特异性识别通过转染质粒过表达的外源p34蛋白以及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)表达的内源p34蛋白；免疫荧光试验表明，外源转染以及内源表达的p34蛋白均能被特异性标记；免疫沉淀(IP)试验结果显示，该单克隆抗体能够特异性的结合HEK293T细胞中外源表达的p34蛋白以及ASFV感染PAMs中内源表达的p34蛋白。综上所述，本研究成功制备了p34蛋白的单克隆抗体，该抗体可以用于内源性p34蛋白的鉴定，为该蛋白的功能研究奠定了基础。