文献类型： 中文期刊
作者： 刘传霞 1 ; 王晓 1 ; 李雪雯 1 ; 鲍苗菲 1 ; 李婷婷 1 ; 陈欣 1 ; 翁长江 1 ; 郑君 1 ;
作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病预防控制国家重点实验室国家非洲猪瘟专业实验室基础免疫创新团队
关键词： 非洲猪瘟病毒;pE120R蛋白;原核表达;单抗隆抗体
期刊名称： 畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2024 年 55 卷 001 期
页码： 388-394
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 本研究旨在表达非洲猪瘟病毒(ASFV)衣壳蛋白pE120R,并制备单克隆抗体,为其功能研究提供材料.以pCAGGS-Flag-pE120R为模板扩增pE120R基因片段,构建原核表达质粒pGEX-6p1-pE120R.将其转化BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导表达为可溶性pE120R蛋白,采用GST Beads纯化pE120R蛋白,免疫BALB/c小鼠,然后取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合,采用间接ELISA方法筛选获得了 1株能够稳定分泌pE120R单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结果表明,成功构建了原核表达质粒pGEX-6p1-pE120R,并获得较高纯度的pE120R蛋白.Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验结果显示,pE120R单抗能特异性识别HEK293T细胞转染质粒表达的Flag-pE120R蛋白和肺泡巨噬细胞(PAMs)感染ASFV后表达的pE120R蛋白.该单抗的结合位点在30~60aa区域,并且该单抗亚类鉴定重链为IgG2a.本研究成功表达并纯化了可溶性的pE120R蛋白;制备了抗pE120R的单抗隆抗体,该抗体具有良好的特异性,为深入探讨ASFV pE120R蛋白的生物学功能奠定了基础.
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