文献类型： 中文期刊

作者： 段安琴 ¹ ; 庞春英 ¹ ; 朱鹏 ¹ ; 邓廷贤 ¹ ; 陆杏蓉 ¹ ; 马小娅 ¹ ; 梁莎莎 ¹ ; 梁贤威 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室

关键词： 水牛;乳汁;乳腺上皮细胞;原代培养

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2017 年 11 期

页码： 3243-3249

收录情况： 北大核心

摘要： 试验旨在从水牛(Bubalus bubalis)乳汁中分离培养水牛乳腺上皮细胞并对其进行鉴定,建立经济、便捷的水牛乳腺上皮细胞分离方法。通过无菌收集高产奶水牛泌乳后期乳汁,将其与PBS按2∶1(V/V)混匀离心;去除上层乳脂,取带少量上清的沉淀,与PBS按上述比例混匀再次离心;将脂肪层去除干净,取沉淀上方1 mL上清及沉淀分别接种于细胞培养皿。通过细胞形态、免疫荧光、生长曲线测定、细胞接种活力、RT-PCR等对分离的细胞进行鉴定。结果表明,试验成功从水牛乳汁的上清和沉淀中分离获得了水牛乳腺上皮细胞,上清部分细胞和杂质较少;而沉淀部分则细胞和杂质较多。细胞呈典型鹅卵石样,无成纤维细胞,细胞活力好,多处于分裂期。当细胞增殖高度融合时,出现乳头状结构和分层生长现象。经免疫荧光鉴定,分离获得的水牛乳腺上皮细胞表达上皮细胞标志蛋白——细胞角蛋白18。水牛乳腺上皮细胞的生长曲线呈S型,符合一般生物学规律。细胞接种存活率的测定结果显示,细胞活力好、贴壁能力强。经RT-PCR检测,水牛乳腺上皮细胞表达乳蛋白及乳脂合成相关基因。从乳汁中分离水牛乳腺上皮细胞并对其进行鉴定,成功建立了水牛乳汁分离乳腺上皮细胞的方法,为研究水牛泌乳机制、改善乳品质、提高产奶量奠定基础。