文献类型： 中文期刊

作者： 徐媛媛 ¹ ; 黄丽清 ¹ ; 陆杏蓉 ¹ ; 冯超 ¹ ; 尚江华 ¹ ;

作者机构： 1.广西水牛研究所/广西水牛遗传繁育重点实验室

关键词： 水牛;β-巯基乙醇;颗粒细胞;自噬;类固醇生成

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2025 年 58 卷 011 期

页码： 2265-2274

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】哺乳动物的卵泡发育包含一系列复杂的过程，而卵泡发育过程受多种因素的调节，其中颗粒细胞在这一过程中起着重要作用。颗粒细胞的增殖和分化会直接影响卵泡的发育。自噬是颗粒细胞发育过程中至关重要的生物过程，β-巯基乙醇（2-mercaptoethanol,2-ME）常被用作一种抗氧化剂来优化家畜卵母细胞体外成熟培养体系，但目前尚缺乏其对水牛卵泡颗粒细胞生长发育的系统研究。本研究的目的是探究2-ME对雷帕霉素（Rapamycin）诱导的水牛卵泡颗粒细胞自噬、凋亡和类固醇激素分泌的影响。【方法】收集水牛卵巢组织，分离培养卵泡颗粒细胞，CCK8法检测细胞活力，筛选2-ME和Rapamycin的最佳处理浓度；选择最佳作用浓度处理卵泡颗粒细胞，采用实时荧光定量PCR检测2-ME对Rapamycin诱导的水牛颗粒细胞自噬、凋亡和类固醇激素分泌相关基因表达的影响；通过ELISA法分析2-ME对颗粒细胞类固醇激素分泌的影响；并采用Western blotting方法检测不同处理下颗粒细胞自噬和凋亡相关蛋白表达水平。【结果】2-ME的最佳处理浓度为50μmol·L^-1,Rapamycin的最佳的处理浓度为25μmol·L^-1；自噬过度激活能够极显著上调自噬相关基因ATG5、LC3和Beclin1的表达（P<0.01），而同时加入2-ME和Rapamycin后3种基因的表达均下调；自噬过度激活能够极显著上调Bax和Caspase3的表达（P<0.01），显著上调Bcl2的表达（P<0.05），而同时加入2-ME和Rapamycin后，Bax和Caspase3的表达有所回复；自噬过度激活能够降低CYP19A1和CYP11A1的表达，而同时加入2-ME和Rapamycin后CYP19A1和CYP11A1的表达量升高，但差异不显著；自噬过度激活能够显著降低颗粒细胞E2和P4的分泌水平（P<0.05），而激活自噬后添加2-ME能够增加E2和P4的分泌水平；自噬能够上调LC3和Beclin1、Caspase3蛋白的表达水平，而同时加入2-ME和Rapamycin后3种蛋白的表达水平均有不同程度的降低。【结论】自噬能够促进水牛卵泡颗粒细胞的凋亡，抑制颗粒细胞分泌E2和P4的能力；而2-ME能够缓解颗粒细胞自噬引起的细胞凋亡，恢复由自噬降低的颗粒细胞分泌E2和P4的能力。综上所述，2-ME在维持水牛卵泡颗粒细胞自噬稳态方面发挥重要作用。