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表达Strep-tag的重组H5N6亚型禽流感病毒反向遗传操作系统的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 周圆一 1 ; 王正祥 1 ; 汪亮 1 ; 徐帅 1 ; 曾巧英 1 ;

作者机构： 1.甘肃农业大学;中国农业科学院兰州兽医研究所

关键词： 禽流感病毒;H5N6亚型;Strep-tag

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2018 年 26 卷 02 期

页码： 15-21

收录情况： 北大核心

摘要： 为构建携带Strep标签的禽流感病毒(Avian infl uenza virus,AIV)A/Goose/Hunan/109/2014(H5N6,HN109)反向遗传操作系统,RT-PCR扩增AIV HN109株8个基因片段,分别连接至p BD双向转录表达载体。通过点突变技术将NS1基因的77~84位的氨基酸替换成Strep-tag。将8个重组质粒共转染293T细胞,48 h后收取细胞上清接种至9~11日龄SPF鸡胚,并检测血凝效价。结果显示,本研究成功拯救病毒株r HN109-NS1-Strep。r HN109-NS1-Strep的8个基因片段序列与亲本毒素HN109株一致;r HN109-NS1-Strep与亲本毒HN109株在MDCK细胞上复制水平相似,在小鼠体内病毒复制能力相似。结果表明,本研究已成功构建携带Strep-tag的H5N6亚型禽流感病毒反向遗传操作系统,为研究该病毒的分子致病机理、传播机制及新型疫苗的研制奠定了基础。

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