文献类型： 中文期刊

作者： 臧浩月 ¹ ; 彭婕 ¹ ; 郭慧琛 ² ; 孙世琪 ² ; 曾巧英 ¹ ; 周静静 ² ;

作者机构： 1.甘肃农业大学动物医学院

2.中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 抗菌肽;抗病毒活性;阳离子氨基酸;疏水性氨基酸;猪繁殖呼吸综合征病毒

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2025 年 41 卷 007 期

页码： 2735-2747

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 由猪繁殖呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引发的猪繁殖呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是目前危害养猪业的主要疾病之一.本研究旨在设计优化天然抗菌肽,筛选具有显著抑制PRRSV活性的抗病毒多肽,为PRRS防控制剂的研发提供新思路.以天蚕素D(cecropin D,CD)为母肽,通过氨基酸替换策略设计了 CD-2、CD-3、CD-4这3个衍生物,利用固相合成技术合成CD及其衍生物,并使用质谱(mass spectrometry,MS)和反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)进行多肽的序列鉴定、纯化和纯度分析.通过圆二色谱研究多肽二级结构,使用CellTiter 96? AQueous单溶液细胞增殖检测试剂盒测定多肽细胞毒性.通过蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)以及间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)研究多肽对 PRRSV 的抗病毒活性及作用阶段.MS以及RP-HPLC结果表明,CD及其衍生物被成功合成,且纯度高达95%.圆二色谱分析结果显示,CD衍生物在细胞膜模拟环境中表现出更稳定且丰富的α螺旋结构.细胞毒性测定结果表明,所有被测多肽在100 ng/mL的工作浓度下的细胞毒性可忽略.多肽抗PRRSV的作用阶段试验结果显示,衍生多肽在病毒侵入阶段的抗病毒活性较母肽显著增强,说明通过引入赖氨酸、色氨酸和苯丙氨酸,增强了母肽的阳离子性和疏水性,进而增强了衍生多肽在侵入阶段的抗PRRSV活性.本研究结果为抗病毒多肽的应用及结构优化提供了理论基础,并为PRRSV的防控提供了新的思路.