文献类型： 中文期刊

作者： 许萌萌 ¹ ; 黄萌萌 ¹ ; 王国栋 ¹ ; 于航博 ¹ ; 韩京哲 ¹ ; 牛鑫鑫 ¹ ; 张玉龙 ¹ ; 韩金泽 ¹ ; 刘润杭 ¹ ; 吴子文 ¹ ; 于晓雪 ² ; 王笑梅 ¹ ; 高玉龙 ¹ ; 李留安 ² ; 祁小乐 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

2.天津农学院动物科学与动物医学学院

关键词： NLRP3;原核表达;多克隆抗体;炎症检测

期刊名称： 中国动物检疫

ISSN： 1005-944X

年卷期： 2024 年 007 期

页码： 96-103

摘要： 为探究禽病病原触发炎症的分子机制,通过克隆和分析鸡源NLRP3基因,原核表达和纯化了NLRP3蛋白,随后用纯化的NLRP3蛋白免疫小鼠制备了NLRP3多克隆抗体,对该抗体进行了ELISA效价检测,并初步测试了该抗体在间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot试验中的应用效果。结果显示:成功表达重组蛋白NLRP3,其相对分子质量约87 kDa,能与His标签抗体发生特异性结合反应;成功制备鸡NLRP3蛋白多克隆抗体,其ELISA效价高达1:32 000;Western blot和IFA检测中,NLRP3多克隆抗体可与NLRP3原核表达蛋白和真核表达蛋白发生特异性反应,还可检测到由IBDV触发的以及LPS刺激产生的巨噬细胞HD11内源性NLRP3蛋白的上调表达。结果表明,制备的鸡NLRP3蛋白多克隆抗体免疫原性较好、效价较高。本试验为进一步研究禽病病原诱发炎症的分子机制提供了重要工具。