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禽网状内皮组织增生症病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 韩京哲 1 ; 黄萌萌 2 ; 许萌萌 2 ; 王国栋 2 ; 张玉龙 2 ; 刘润杭 2 ; 于航博 2 ; 吴子文 2 ; 柯二靖 1 ; 凌丹 2 ; 于晓雪 1 ; 高玉龙 2 ; 李留安 1 ; 祁小乐 2 ;

作者机构： 1.天津农学院动物科学与动物医学学院

2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

关键词： 禽网状内皮组织增生症病毒;囊膜蛋白gp90;原核表达;杂交瘤细胞;单克隆抗体

期刊名称： 中国家禽

ISSN： 1004-6364

年卷期： 2025 年 47 卷 009 期

页码： 66-73

收录情况： 北大核心

摘要： 为研制禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜蛋白gp90单克隆抗体,试验构建重组原核表达质粒pCold-gp90,转化至感受态细胞BL21中进行蛋白诱导表达;采用纯化的gp90蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞分选技术筛选鉴定阳性杂交瘤细胞,并制备单克隆抗体腹水,对单克隆抗体的亚型、效价进行测定;并初步测试单克隆抗体在Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)中检测gp90蛋白和REV中的应用效果.结果显示:REV囊膜蛋白gp90获得成功表达和纯化,获得3株能稳定分泌REV gp90单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,该单克隆抗体亚型均为IgG1、Kappa,腹水效价均可达1∶64 000;该单克隆抗体不仅可用于Western blot或IFA检测 gp90原核表达蛋白和真核表达蛋白,还可用于IFA检测REV的TCID50效价.研究表明,成功制备的REV gp90单克隆抗体为进一步的REV检测方法建立和gp90蛋白功能研究提供了重要工具.

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