文献类型： 中文期刊

作者： 高金慧 ¹ ; 王素艳 ² ; 刘芮 ² ; 祁小乐 ² ; 陈运通 ² ; 张艳萍 ² ; 崔红玉 ² ; 刘永振 ² ; 段雨路 ² ; 高立 ² ; 高玉龙 ² ;

作者机构： 1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院

2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

关键词： 禽呼肠孤病毒;基因Ⅳ型;σC蛋白;单克隆抗体;功能鉴定

期刊名称： 中国动物检疫

ISSN： 1005-944X

年卷期： 2024 年 008 期

页码： 98-104

摘要： 为制备基因Ⅳ型(GC Ⅳ)禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)σC蛋白单克隆抗体,构建了重组原核表达质粒pCold-I-ARV-GC Ⅳ-σC,将重组质粒导入感受态细胞BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达;随后将纯化后的σC蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选获得阳性杂交瘤细胞;以间接免疫荧光(IFA)和蛋白免疫印迹(Western blot)试验鉴定杂交瘤细胞后,将杂交瘤细胞株通过腹腔注射小鼠制备单克隆抗体腹水,以ELISA测定腹水效价。结果显示:成功筛选出一株分泌ARV GC Ⅳ σC蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株(1H4);制备的单克隆抗体能与ARV GC Ⅳ σC蛋白发生反应,同时与感染不同基因型ARV的鸡肝癌细胞(LMH)均有良好的反应性;该单克隆抗体识别重链为IgG1,其腹水ELISA效价为1:256 000。结果表明,成功制备ARV GC Ⅳ σC蛋白单克隆抗体,其效价高,反应性良好,为进一步研究σC蛋白功能、ARV致病机理以及建立临床诊断方法奠定了基础。