文献类型： 中文期刊

作者： 张爽 ¹ ; 郝鹏飞 ² ; 伊立超 ¹ ; 姜宇航 ² ; 郝嘉翼 ² ; 李乐天 ² ; 时小双 ² ; 徐鹏 ² ; 金宁一 ² ; 贾立军 ¹ ; 李昌 ² ;

作者机构： 1.延边大学农学院

2.中国农业科学院长春兽医研究所/中国医学科学院人兽共患病毒病防控关键技术研究创新单元

关键词： 猪δ冠状病毒;杆状病毒;受体结合域;昆虫细胞

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2021 年 009 期

页码： 103-108

收录情况： 北大核心

摘要： 为了获得具有天然构象且反应原性良好的猪δ冠状病毒（（PDCoV））受体结合域（RBD）蛋白,根据PDCoV流行株CC-HN2K-02株S蛋白编码序列,筛选、设计、优化并合成其RBD段DNA序列,将其亚克隆至杆状病毒双表达载体pFastBac^TMDual上,获得pFBD-PDR重组质粒。将该重组质粒转化到DH10Bac^TM大肠杆菌感受态细胞中,进行2轮蓝白斑筛选并进行PCR鉴定获得阳性重组杆状质粒Bacmid-PDR;通过脂质体转染SF9细胞进行病毒拯救,出现明显病变后收取上清,并在正常SF9细胞中盲传3代,获得的杆状病毒命名为rBV-PDR。利用间接免疫荧光法（IFA）和Western blot检测rBV-PDR感染昆虫细胞后的蛋白表达情况。结果:重组质粒pFBD-PDR酶切验证正确,重组杆粒Bacmid-PDR构建成功,杆状病毒中能够表达PDR蛋白且能与Sterp-tag抗体发生特异性结合,IFA鉴定出特异性红色荧光,表明本试验成功表达了PDCoV-RBD蛋白,为深入开展PDCoV抗体的制备、新型疫苗、诊断试剂研发奠定了基础。