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PEDV RBD蛋白多肽抗体的制备与鉴定

文献类型: 中文期刊

作者: 俞佳钰 1 ; 姜宇航 2 ; 张国庆 2 ; 伊立超 2 ; 张爽 2 ; 李乐天 2 ; 秦爱建 1 ; 李昌 2 ;

作者机构: 1.扬州大学兽医学院

2.中国农业科学院长春兽医研究所病原微生物生物安全全国重点实验室/吉林省人兽共患病预防控制重点实验室

关键词: PEDV;RBD;抗血清;特异性

期刊名称: 中国兽医学报

ISSN: 1005-4545

年卷期: 2025 年 45 卷 007 期

页码: 1357-1365

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 根据猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea, PEDV)氨基酸序列(GenBank登录号:AKN45969.1)筛选针对受体结合结构域(receptor binding domain, RBD)的表位抗原,制备PEDV RBD多克隆抗体并进行鉴定。采用生物信息学分析软件对PEDV RBD潜在抗原表位进行预测,并与猪冠状病毒属毒株进行序列比对,筛选的优势抗原表位与血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)载体蛋白进行偶联后直接合成多肽抗原,然后免疫小鼠制备相应的特异性抗体,并应用Western blot技术和间接免疫荧光技术(IFA)鉴定抗体的特异性,间接ELISA方法测定抗体效价。结果显示,选择的PEDV RBD优势表位序列与其他18株PEDV毒株的序列相似性高达100%,与11株猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus, TGEV)病毒株(27.8%~29.3%)以及16株PDCoV病毒株(10.5%~13.4%)序列相似性低,说明该表位保守性良好。Western blot显示,制备的多肽抗体能特异性识别Expi293F细胞与杆状病毒系统过表达的PEDV RBD蛋白,同时抗体1∶2 000稀释后依然能够检测到PEDV感染Vero细胞表达的PEDV S蛋白,而与TGEV和PDCoV感染的ST细胞无反应,表明该多肽抗体特异性良好;ELISA检测小鼠血清中特异性抗体的效价最高可达1∶25 600。上述结果显示,利用生物信息学技术成功预测PEDV RBD蛋白抗原表位,制备了特异性的PEDV RBD多肽抗体。

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