文献类型： 中文期刊

作者： 李明玉 ¹ ; 姜宇航 ¹ ; 张国庆 ² ; 邓玲聪 ² ; 李乐天 ² ; 郝嘉翼 ² ; 张雪 ² ; 李佳妮 ² ; 李昌 ² ;

作者机构： 1.西北农林科技大学动物医学院

2.中国农业科学院长春兽医研究所

关键词： PDCoV;N蛋白;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2025 年 45 卷 008 期

页码： 1587-1592,1608

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将猪δ冠状病毒（PDCoV） N蛋白基因优化后连接至pET-30a载体上，获得pET-30a-N质粒，热激法将其转入3株BL21大肠杆菌进行表达，探究蛋白表达的条件，并应用Ni Focurose 6FF（IMAC）纯化蛋白。以纯化后蛋白作为抗原免疫新西兰白兔，获得了PDCoV N蛋白多抗，并利用间接ELISA方法鉴定抗体效价及Western blot和间接免疫荧光（indirect immunofluorescence, IFA）鉴定抗体的特异性。结果显示，pET-30a-N质粒在BL21 Star^TM（DE3）中表达水平较高，且最佳表达条件为37℃4 h;纯化后目的蛋白纯度可达90.3%,间接ELISA结果显示抗体效价可达1∶204 800;IFA和Western blot检测表明制备出的兔多克隆抗体具有良好特异性，并可特异性检测PDCoV的感染。结果表明，本试验制备出特异性识别PDCoV N蛋白的多克隆抗体，为后续探究PDCoV N蛋白的功能提供了一些参考，为建立PDCoV诊断方法奠定了基础。