文献类型： 中文期刊

作者： 王晓捷 ¹ ; 崔蒙蒙 ¹ ; 常天明 ¹ ; 王刚 ¹ ; 李江南 ¹ ; 何希君 ¹ ; 刘长明 ¹ ; 熊涛 ¹ ; 翁长江 ¹ ;

作者机构： 1.长江大学生命科学学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室;华中农业大学动物医学院

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;猪圆环病毒2型;RNAscope;共感染

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2018 年 11 期

页码： 1015-1019

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： RNAscope原位杂交是一种检测细胞内靶标RNA的新型检测技术,为验证该技术能否用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒-猪圆环病毒2型(PRRSV-PCV2)的共感染,本研究针对PRRSV N基因和PCV2 Rep基因序列,分别设计两组特异性探针,利用RNAscope原位杂交技术分别检测了PRRSV和PCV2单独感染或PRRSV-PCV2共感染的猪肺泡巨噬细胞(PAMs)以及一例PRRSV-PCV2共感染猪的多个组织样品,同时采用间接免疫荧光试验(IFA)以及RNAscope原位杂交联合IFA对PRRSV和PCV2单独感染或PRRSV-PCV2共感染的PAMs进行检测。结果显示,通过RNAscope原位杂交技术检测PRRSV N基因和PCV2 Rep基因检测到同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染;通过IFA检测PRRSV Nsp9蛋白和PCV2 Cap蛋白检测到同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染;两种方法联合使用结果显示,通过RNAscope探针检测PRRSV N基因和IFA方法检测PCV2 Cap蛋白,或者通过RNAscope探针检测PCV2 Rep基因同时用IFA方法检测PRRSV Nsp9蛋白来检测同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染。同时,RNAscope原位杂交技术能够在PRRSV-PCV2共感染猪的肺脏、脾脏和淋巴结的组织切片中检测到PRRSV和PCV2共感染的细胞。以上结果表明RNAscope原位杂交技术适用于PRRSV-PCV2共感染的细胞和组织样品的检测,为研究PRRSV-PCV2共感染及协同致病机制奠定了基础。