文献类型： 中文期刊

作者： 崔宏全 ¹ ; 姜成刚 ¹ ; 文莉莉 ¹ ; 范宇琴 ¹ ; 刘英豪 ¹ ; 都兰 ¹ ; 王靖飞 ¹ ; 赵东明 ¹ ; 何希君 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 非洲猪瘟病毒;肺泡巨噬细胞;极化

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年 47 卷 001 期

页码： 54-62

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究非洲猪瘟病毒（ASFV）对巨噬细胞极化表型的影响，本研究将100 ng/mL脂多糖（LPS）+50 ng/mL IFN-γ诱导猪肺泡巨噬细胞（PAM）成为M1型巨噬细胞（M1组），用50 ng/mL IL-4诱导PAM成为M2型巨噬细胞（M2组），以不做任何处理的PAM作为对照组。24 h后采用荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞中M1型细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α及M2型细胞因子IL-10及其标志物精氨酸酶-1(Arg-1)、几丁质酶-1(Ym-1)、过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）mRNA的转录水平；采用Luminex细胞多因子试剂盒检测各组细胞上清中M1型细胞因子TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-18和M2型细胞因子IL-1受体拮抗剂（IL-1RA）、IL-10的表达水平；采用NO试剂盒及流式细胞术分别检测各组细胞上清中M1型巨噬细胞代谢物NO的含量及其细胞表面标志物CD80+细胞的占比；采用western blot检测各组细胞中M2型巨噬细胞标志物Arg-1蛋白的表达。结果显示，M1组中促炎细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α mRNA的转录和蛋白分泌水平、IL-1α的分泌水平、NO的含量及CD80+细胞的占比均显著和极显著高于其余两组。M2组中抑炎细胞因子IL-10和Arg-1 mRNA的转录和蛋白的分泌水平均极显著高于其余两组。未检测到IL-18和IL-1RA的表达。在此基础上将ASFV Pig/HLJ/2018株以MOI 1感染PAM，不同时间后（0、12 h、24 h、36 h及48 h）分别按照上述各方法检测PAM中各细胞因子及极化标志物的转录水平及蛋白的分泌水平，分析ASFV感染后巨噬细胞表型的极化方向。结果显示，与对照组相比，ASFV感染后PAM中M1型细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6的转录水平均极显著升高，IL-6的转录水平一直维持在较高水平，PAM中M2型细胞因子IL-10及Arg-1的转录水平先升后降，并分别于感染后48 h与12 h达到峰值，后者随后下降；Ym-1与PPAR的转录水平均在感染后24 h达到峰值，随后下降；ASFV感染后PAM中部分细胞因子蛋白的分泌水平与其转录水平的变化趋势类似；NO含量显著和极显著升高，CD80+细胞占比显著升高直至达到峰值；Arg-1的表达量均极显著升高（除了感染后48 h），在感染后36 h达到峰值后下降。上述结果表明，ASFV感染后PAM同时向M1型及M2型极化，M1型极化随着感染时间的延长持续存在，而M2型极化则呈先上升后下降的趋势。本研究为进一步探究ASFV感染对宿主免疫状态的影响及宿主如何响应ASFV感染的机制奠定了基础。