文献类型： 中文期刊

作者： 王可欣 ¹ ; Weldu Tesfagaber ¹ ; 王婉 ¹ ; 尹丽 ¹ ; 孔惠 ¹ ; 张振江 ¹ ; 李芳 ¹ ; 高彩霞 ¹ ; 步志高 ¹ ; 赵东明 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 猪白细胞抗原I;单克隆抗体;western blot;非洲猪瘟病毒

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年 47 卷 001 期

页码： 90-95

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 猪I类白细胞抗原（SLA I）是机体内至关重要的免疫相关蛋白，是启动特异性细胞毒性T细胞（CTL）免疫应答的核心分子。在机体内，SLA I负责将内源性抗原肽递呈至细胞膜表面，由CD8+T细胞识别，启动机体适应性免疫应答。为了制备SLA I的单克隆抗体（MAb），本研究将SLA I-1*04:01等位基因胞外区序列与麦芽糖结合蛋白（MBP）序列连接，在大肠杆菌原核表达系统中表达，获得可溶性重组蛋白MBP-SLA I。经亲和层析纯化后，采用MBP-SLA I免疫BALB/c小鼠3次，采用ELISA检测小鼠血清抗体水平，对血清抗体效价在1:10 000以上的小鼠进一步冲击免疫后，分离小鼠脾脏B淋巴细胞，与SP2/0骨髓瘤细胞融合。采用ELISA方法筛选阳性的杂交瘤细胞进行3次克隆纯化，最终筛选得到稳定分泌SLA I抗体的杂交瘤细胞株MAb-1A11。经ELISA检测纯化后的MAb-1A11效价可达1:3 200，经小鼠MAb抗体亚类鉴定试剂盒鉴定其重链为IgG2b，轻链为κ。采用western blot检测该抗体的特异性，结果显示，MAb-1A11能够识别猪肺泡巨噬细胞（PAM）表达的内源性SLA I，在42 ku处出特异性条带，而对HEK293T细胞中表达的同源物人白细胞抗原无交叉识别作用。利用MAb-1A11为一抗，采用western blot进一步检测非洲猪瘟病毒（ASFV）HLJ/18-6GD株感染的PAM中SLA I的表达水平，结果显示，随着ASFV感染时间的延长，SLA I表达水平出现轻微下降。本研究制备了SLA I的MAb，并初步将其应用于ASFV感染机制的研究中，为深入了解SLA I所受调控的机制提供了可靠工具。