文献类型： 中文期刊

作者： 李沛恒 ¹ ; 邹万成 ² ; 陈竞 ² ; 张国庆 ² ; 崔春梅 ² ; 蒋嵘 ² ; 金宁一 ² ; 李昌 ² ;

作者机构： 1.吉林农业大学动物医学院

2.中国农业科学院长春兽医研究所中国医学科学院人兽共患病毒病防控关键技术研究创新单元

关键词： 猫IFN-α;构建与表达;抗病毒活性;干扰素刺激基因

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2024 年 32 卷 006 期

页码： 17-24

摘要： 本文为探究猫IFN-α(FeIFN-α)在体外MDCK、F81细胞中的抗病毒效果，为后续体内实验提供参考。根据猫IFN-α(GenBank登录号：NP＿001027000.1)序列并添加6×His标签，合成后通过pUC57载体进行克隆，然后亚克隆至pcDNA3.1载体，获得含有目的基因的真核表达质粒，转染293T细胞，通过Western blot检测FeIFN-α的表达情况。通过重组绿色荧光蛋白水疱性口炎病毒(VSV-GFP)感染细胞实验，利用结晶紫染色法进行FeIFN-α抗病毒活性初步分析并确定最佳稀释倍数，通过荧光观察法、流式细胞术检测其抗病毒活性，最后通过相对荧光定量qPCR技术检测猫IFN-α对干扰素刺激基因(ISG15、MX1、OAS1)的调控作用。结果表明，成功表达FeIFN-α并具有生物学活性，且可以明显抑制VSV-GFP病毒侵染F81、MDCK细胞，qPCR结果分析表明猫IFN-α在F81、MDCK细胞中均可有效诱导ISG15、MX1、OAS1基因上调。本研究结果为后续犬猫体内抗病毒实验提供参考依据。