文献类型： 中文期刊
作者： 冯倩倩 1 ; 王召阳 2 ; 袁维峰 1 ; 姜一曈 1 ; 庞忠宝 1 ; 朱鸿飞 1 ; 贾红 1 ;
作者机构： 1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
2.华南农业大学兽医学院
关键词： 犬细小病毒;VHH抗体;噬菌体文库;真核表达
期刊名称： 中国兽药杂志
ISSN： 1002-1280
年卷期： 2023 年 001 期
页码： 19-31
摘要： 为构建特异性犬细小病毒（Canine parvovirus, CPV）的纳米抗体库，并获得特异性抗CPV的重链单域抗体（Single variable domain on a heavy chain antibodies, VHH抗体）,以分离鉴定的一株CPV-2c毒株（TS02株）作为免疫原免疫羊驼，四免后采集外周血，分离淋巴细胞，利用巢式PCR扩增VHH序列，通过噬菌体展示技术成功构建了纳米抗体的CPV免疫文库，进一步通过ELISA特异性筛选具有高亲和力的抗CPV纳米抗体序列。将筛选出的抗体序列插入pcDNA3.1真核表达载体构建pcDNA3.1-VHH重组质粒，采用PEI转染高密度的HEK293F悬浮细胞，瞬时表达、纯化VHH,进行鉴定。结果表明，四次免疫后羊驼血清效价高达1∶25000,达到了建库要求，构建的纳米抗体的CPV免疫文库，库容达2×10~6 CFU/mL,文库多样性良好。通过特异性筛选获得了4株具有高亲和力和特异性的抗CPV纳米抗体序列，采用HEK293F细胞瞬时表达并纯化获得4个重组VHH,分别是CPV-VHH-H1、CPV-VHH-D4、CPV-VHH-F5和CPV-VHH-E3。ELISA和IFA试验结果表明，表达出的4株重组纳米抗体均能够特异性结合CPV。本研究成功构建了CPV特异性纳米抗体文库，并筛选出4株特异性结合CPV的VHH抗体，为VHH抗体在犬细小的诊断和治疗方面的应用进行了初步探索。
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