文献类型： 中文期刊

作者： 李松达 ¹ ; 蒋亚君 ¹ ; 庞忠宝 ¹ ; 黄颖 ¹ ; 翟文竹 ¹ ; 朱鸿飞 ¹ ; 赵晓民 ¹ ; 贾红 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

关键词： 非洲猪瘟病毒;多重荧光定量PCR;微滴式数字PCR

期刊名称： 动物医学进展

ISSN：

年卷期： 2024 年 004 期

页码： 32-39

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种鉴别诊断野生株和基因缺失株非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的方法,针对ASFV的B646L、EP402R、DP96R基因保守序列设计3套引物和探针,优化三重荧光定量PCR体系作为基础建立微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)检测方法,并对方法的特异性、灵敏性及重复性进行评估.结果显示,优化后的多重荧光定量PCR检测方法的标准曲线线性关系良好,对PRRSV、PEDV、PRV、VSV、PCV、RNase-free水、重组质粒标准品进行特异性检测,特异性良好;重复性试验结果显示,变异系数均小于2%;对3种重组质粒的最低检测下限均为102 copies/μL.参照上述多重荧光定量PCR方法优化后的条件,进行多重ddPCR检测方法的建立,并且对该方法进行评价.结果显示,ddPCR检测方法标准曲线的线性关系良好;特异性及重复性良好;最低检测下限B646L为11.6 copies/μL、EP402R为13.3 copies/μL、DP96R为16.9 copies/μL;ddPCR的检测灵敏度比荧光定量PCR有优势.使用建立的多重ddPCR方法对14份P3实验室中的样品进行实验室样品检测,样品检测符合率达到100%.成功建立了能够同时检测用于鉴别野毒株感染与疫苗株的荧光定量PCR和微滴式ddPCR方法.