文献类型： 中文期刊

作者： 陈世钰 ¹ ; 蒋亚君 ¹ ; 鑫婷 ¹ ; 崔帅 ¹ ; 王洋 ¹ ; 郭晓宇 ¹ ; 贾红 ¹ ; 朱鸿飞 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

关键词： 非洲猪瘟病毒;MGF360-13L基因;序列分析;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2024 年 32 卷 001 期

页码： 194-201

收录情况： 北大核心

摘要： 本研究旨在通过构建非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF360-13L基因原核表达系统表达13L蛋白,并制备其鼠源多克隆抗体.利用生物信息学方法,对ASFV MGF360-13L基因进行序列比对,分析其同源性、构建遗传进化树;将非洲猪瘟病毒MGF360-13L基因密码子优化后进行合成,连接至PET32a载体构建重组质粒pET32a-13L,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达获得目的蛋白,采用镍柱纯化法进行蛋白纯化.将纯化后的蛋白乳化后免疫8周龄BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot检测抗体特异性.SDS-PAGE结果显示,重组蛋白分子量大小为58.2 kDa,主要以包涵体形式存在;Western blot结果显示免疫猪阳性血清可特异性识别该蛋白,具有良好的反应性,表明该重组蛋白获得正确表达.利用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体进行Western blot,结果显示其能与MGF360-13L重组蛋白发生特异性反应.间接ELISA测定抗体效价高达1:256 000.本研究成功制备非洲猪瘟病毒MGF360-13L重组蛋白,以其为免疫原制备的多克隆抗体具备较高的特异性和反应性,为进一步阐述MGF360-13L蛋白的生物学功能和研制非洲猪瘟新型疫苗奠定了基础.