文献类型： 中文期刊

作者： 原亮 ¹ ; 韩晓玺 ¹ ; 巩颖超 ¹ ; 樊夏楠 ¹ ; 郝蓓莉 ¹ ; 郝双双 ¹ ; 李昌文 ² ; 常轶聪 ¹ ; 李睿 ¹ ; 刘芳萍 ¹ ;

作者机构： 1.东北农业大学动物医学学院

2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

关键词： 鸡;肠炎沙门菌;SipD蛋白;生物信息学;原核表达

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2024 年 51 卷 007 期

页码： 2998-3007

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】预测肠炎沙门菌（Salmonella Enteritidis, SE）SipD蛋白的潜在生物学功能，并表达纯化该蛋白，为探索SipD蛋白作为抗沙门菌纳米抗体的候选抗原提供理论依据。【方法】利用DNAStar软件对GenBank中公布的不同血清型沙门菌株SipD蛋白氨基酸序列进行相似性比对，并通过在线软件对SipD蛋白进行生物信息学分析。根据GenBank中SipD基因序列设计引物，以鸡肠炎沙门菌标准菌株（ATCC 13076）为模板，PCR扩增SipD基因，构建pET-32a（+）-SipD重组质粒，并转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞。应用IPTG诱导重组SipD蛋白的表达，并利用Ni²⁺亲和层析法纯化。应用SDS-PAGE和Western blotting检测SipD蛋白的表达情况。【结果】SipD蛋白在不同血清型沙门菌之间高度保守；SipD蛋白分子式为C₁₆₁₉H₂₅₇₃N₄₄₁O₅₄₀S₈,无跨膜区，为膜外蛋白，不存在信号肽，该蛋白的第1～343位氨基酸具有来自超家族侵袭质粒抗原IpaD的保守结构域；SipD蛋白二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角、无规则卷曲占比分别为59.18%、6.41%、3.21%和31.20%;SipD蛋白与B细胞结合的抗原表位有12个。SipD基因长1 029 bp,在大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中以可溶性蛋白的形式表达；经纯化、透析、浓缩后蛋白浓度为8.6 mg/mL。SDS-PAGE和Western blotting分析发现，SipD蛋白纯度较高，可用于免疫羊驼制备纳米抗体。【结论】SipD蛋白为膜外蛋白，具有较多抗原结合位点；经表达纯化得到纯度较高的SipD重组蛋白，为进一步制备靶向鸡肠炎沙门菌SipD蛋白的纳米抗体提供材料。