文献类型： 中文期刊

作者： 钟梦丹 ¹ ; 吉艳红 ² ; 张吉豫 ¹ ; 朱啟超 ² ; 冯赛祥 ¹ ; 廖明 ¹ ;

作者机构： 1.华南农业大学兽医学院

2.中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控重点实验室

关键词： CHI3L1;纳米抗体;表征

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2025 年 56 卷 007 期

页码： 3453-3462

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 几丁质酶3样蛋白1(CHI3L1)在感染甲型流感病毒(IAV)后,表达水平发生显著变化,暗示其可能参与抗病毒免疫反应的调控.然而,当前尚未发现CHI3L1与IAV之间的直接相互作用.由于CHI3L1在免疫过程中可能具有重要作用,研究者推测其可能在调节抗病毒免疫中扮演关键角色.然而,现有的研究工具不足,迫切需要开发一种高效的CHI3L1检测方法,以助力后续的研究工作.因此本研究以CHI3L1为目标蛋白,通过构建CHI3L1真核表达质粒,成功进行了体外表达与纯化,并使用该纯化蛋白免疫羊驼.通过4次免疫后,采集羊驼外周血并分离淋巴细胞,测定抗体水平达到了 1∶64 000,符合构建噬菌体展示文库的标准.随后,利用巢式PCR扩增了单个重链可变区(VHH)基因,并将该基因克隆至pComb噬菌体载体,成功构建了一个库容量为1.2×108 cfu·mL-1的CHI3L1纳米抗体噬菌体展示文库.通过三轮的免疫亲和筛选和富集,筛选得到四株不同序列的特异性纳米抗体(Nb).随后,研究进一步构建了 CHI3L1特异性纳米抗体的真核表达质粒,并转染293F细胞进行表达,使用Protein A亲和纯化系统纯化了所表达的蛋白.经ELISA测定,Nb-YC8和Nb-YC4显示出较好的亲和力.利用Western blot进一步验证了这些纳米抗体与商品化抗体相比,能够正确识别CHI3L1蛋白.免疫荧光分析显示,Nb-YC4、Nb-YD10和Nb-YF8能够识别293T细胞中表达的CHI3L1蛋白,而Nb-YC8未能成功识别CHI3L1,推测其可能识别的是线性表位.本研究成功筛选并鉴定了 4株具有不同亲和力的CHI3L1特异性纳米抗体,这些抗体有望成为研究机体免疫系统中CHI3L1功能的有力工具.通过对CHI3L1的进一步研究,可能有助于揭示其在抗病毒免疫反应中的潜在作用,并为开发基于CHI3L1的诊断或治疗手段提供基础.