文献类型： 中文期刊

作者： 武玉花 ¹ ; 翟杉杉 ¹ ; 普豪祯 ¹ ; 高鸿飞 ¹ ; 张华 ² ; 李俊 ¹ ; 李允静 ¹ ; 肖芳 ¹ ; 吴刚 ¹ ; 徐利群 ² ;

作者机构： 1.中国农业科学院油料作物研究所/农业农村部农业转基因生物溯源重点实验室

2.农业农村部科技发展中心

关键词： 基因编辑;测序;实时荧光PCR;数字PCR;可编程内切酶

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2024 年 57 卷 017 期

页码： 3318-3334

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 随着基因编辑技术的兴起,基因编辑产品已经从实验室走向产业化应用,2022 年农业农村部针对没有引入外源基因的基因编辑植物的安全评价,专门出台了《农业用基因编辑植物安全评价指南(试行)》,2023 年为基因编辑大豆AE15-18-1 颁发了首个生物安全证书,标志着我国正式开启了基因编辑作物的产业化进程.基因编辑产品不同于传统转基因产品,不含有外源 DNA 序列,常用的转基因检测策略不适用于基因编辑产品的检测.随着农作物基因编辑产品产业化进程的积极推进,如何高效准确检测是否为基因编辑产品及其编辑特征,是关系到基因编辑产品产业化利用和知识产权保护的重要依据,急需开发适用于基因编辑产品的检测技术.以检测靶标序列是否被编辑为目标,基于PCR、测序等技术开发出了很多检测技术,并广泛应用于产品研发过程中基因编辑产品的筛选.产业化后的安全监管和知识产权保护,不仅要检测样品是否被编辑,还要快速识别待测样品的核苷酸序列特征,确定样品的来源和身份,进而对基因编辑成分进行精准定量,判定是否需要定量标识.目前,对于含有少数几个碱基插入、缺失及单碱基变异等突变的基因编辑产品,难以应用常规 PCR 或测序等技术进行快速的身份鉴定,更难以对基因编辑成分的含量进行精准定量检测.以快速识别编辑后的 DNA 序列特征、并精准定量为目标,根据基因编辑产品的分子特征,本文综述了基于凝胶电泳的普通 PCR 法、基于测序的检测方法、基于实时荧光 PCR 的检测方法、基于数字 PCR 的检测方法、基于可编程内切酶的方法,以及基于仪器的检测方法在基因编辑产品检测中的应用及优缺点,以期探索出适用于基因编辑产品的检测和定量策略,为后续基因编辑产品检测方法的开发提供参考.