文献类型： 中文期刊

作者： 蔡珠明 ¹ ; 党光辉 ¹ ; 臧鑫鑫 ¹ ; 邵明珠 ¹ ; 唐阳阳 ¹ ; 鹿萍 ¹ ; 崔莹莹 ¹ ; 崔子寅 ¹ ; 刘思国 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队

关键词： 结核分枝杆菌复合群;副结核分枝杆菌;禽分枝杆菌禽亚种;多重Taq Man荧光定量PCR

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2023 年 001 期

页码： 51-59

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 结核分枝杆菌复合群（MTBC）、包括结核分枝杆菌（MTB）、牛分枝杆菌（MB）、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等；非结核分枝杆菌（NTM）中禽分枝杆菌（MA）是自然界常见的动物致病菌，包含4个亚种，分别为禽分枝杆菌禽亚种（MAA）、禽分枝杆菌人/猪亚种（MAH）、禽分枝杆菌副结核亚种/副结核分枝杆菌（MAP）和禽分枝杆菌森林土壤亚种（MAS）。为建立MTBC、MAP和MAA的多重荧光定量PCR检测方法，本研究基于MTBC、MAP和MAA的特异性基因devR、F57和IS901分别设计引物及探针，通过优化各反应条件，建立了一种可同时检测3种分枝杆菌的多重Taq Man荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示，该方法对MTB、MB、MAP、MAA和MAS检测为阳性，对其他畜禽病原菌，包括MAH、13种NTM和7种非分枝杆菌检测结果均为阴性，特异性较强。敏感性试验结果显示，该方法对MB、MAP和MAA重组质粒标准品的检测限均为1.0拷贝/μL，敏感性较高；重复性试验结果显示，批内与批间重复性试验变异系数均小于2.5%，重复性较好。利用该方法检测体外模拟污染（MB、MAP和MAA菌液浓度分别为1.0×10~3cfu/mL～1.0×10~0cfu/mL）的27份牛抗凝血和12份牛淋巴结组织样品，确定该方法对3种菌的检测限，结果显示该方法对3种菌的检测限均为1.0 cfu/mL～10.0 cfu/mL。将浓度为1.0×10~6cfu/mL的MB、MAP和MAA菌液分别单一、两两混合、三种菌混合感染BALB/c小鼠，5 d后，剖杀各组小鼠并取各组织及血液样品，同时采用该方法、常规单一PCR及细菌分离培养方法检测，比较三者的检测结果。结果显示，多重荧光定量PCR方法对不同感染组小鼠的各组织样品检出率为98.1%（212/216），常规单一PCR方法的检出率为81.5%（176/216），细菌分离培养的检出率为52.8%（114/216），多重荧光定量PCR与常规单一PCR的阳性符合率均为100.0%（176/176），与细菌分离培养鉴定结果的阳性符合率均为100.0%（114/114）。本研究首次建立了能够同时检测MTBC、MAP和MAA的Taq Man多重荧光定量PCR方法，其特异性强、敏感性高、重复性及稳定性好，检测性能强，可以用于临床各种样品的检测，为这3种病原的快速检测和流行病学调查提供了技术手段。