文献类型： 中文期刊

作者： 陈春文 ¹ ; 姜艳艳 ² ; 郭若男 ² ; 段祎凡 ² ; 高云洁 ¹ ; 张镇钧 ² ; 冯婷婷 ² ; 王慧 ² ; 李梦雨 ¹ ; 聂蝉蝉 ¹ ; 崔莹莹 ² ; 党光辉 ² ; 刘思国 ² ;

作者机构： 1.东北农业大学动物医学学院

2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室

关键词： Rv1487;蛋白酶;结核分枝杆菌;巨噬细胞;免疫反应

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年 47 卷 007 期

页码： 721-730

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 结核病是由结核分枝杆菌（MTB）引起的一种重要人兽共患传染病，现有的卡介苗无法对MTB感染提供有效的免疫保护。为探寻更有效的MTB保护性抗原，本团队前期通过生物信息学软件分析发现MTB Rv1487蛋白具有蛋白酶活性。为研究Rv1487蛋白酶对宿主免疫反应的影响，本研究采用噬菌体介导的同源重组方法构建rv1487基因缺失株ΔRv1487和回补株ΔRv1487+Rv1487，并经PCR与southern blot鉴定正确后，将ΔRv1487与ΔRv1487+Rv1487株连续传5代，PCR鉴定结果显示，ΔRv1487+Rv1487株出现约345 bp的目的条带，ΔRv1487株则无该条带；Southern blot鉴定结果显示，经Bam H I酶切后H37Ra与ΔRv1487株分别出现4.3 kb与7.6 kb的目的条带，经Nhe I酶切后上述两株菌分别出现5.6 kb和8.9 kb的目的条带。传5代后回补株出现约435 bp的目的条带，缺失株则无该目的条带。表明正确构建了遗传稳定性较好的rv1487基因缺失株和回补株。通过检测各菌液OD_600nm值绘制生长曲线，利用H37Ra菌株感染小鼠和人巨噬细胞后不同时间通过qPCR检测细胞中rv1487基因的相对转录水平，将H37Ra、ΔRv1487和ΔRv1487+Rv1487株分别感染巨噬细胞12 h和24 h，通过qPCR检测促炎细胞因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）基因的相对转录水平；感染后12 h、24 h和48 h，分别采用qPCR检测细菌在巨噬细胞胞内的定植量。生长曲线测定结果显示，各菌株的生长速度基本一致；qPCR检测结果显示，与未感染H37Ra的巨噬细胞相比，感染后72 h该细胞中rv1487基因的转录水平显著升高（P<0.05），感染后不同时间人巨噬细胞中rv1487基因的转录水平均极显著升高（P<0.01和P<0.001）；感染后12 h和24 h，ΔRv1487株感染的细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的转录水平均显著和极显著低于H37Ra和ΔRv1487+Rv1487株感染的细胞（P<0.05、P<0.01和P<0.001）。感染后24 h和48 h，ΔRv1487株感染细胞中的细菌数显著高于H37Ra菌株感染的细胞（P<0.05）；感染后12 h和24 h，ΔRv1487株感染细胞中的细菌数显著和极显著高于ΔRv1487+Rv1487株感染的细胞（P<0.05、P<0.001）。以上结果表明，Rv1487蛋白酶参与MTB的感染过程，促进促炎细胞因子的转录并增强Th1及Th17细胞免疫应答，抑制MTB在巨噬细胞内的定植。本研究为MTB候选抗原蛋白的筛选及结核病疫苗的研究提供参考依据。