文献类型： 中文期刊

作者： 姜艳艳 ¹ ; 鹿萍 ¹ ; 崔宁 ¹ ; 陈凡若 ¹ ; 崔莹莹 ¹ ; 党光辉 ¹ ; 刘思国 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 副结核分枝杆菌;PanCD基因;基因缺失株;毒力评价;减毒活疫苗

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2024 年 007 期

页码： 36-42

收录情况： 北大核心

摘要： 为了开发出能有效防控副结核病的减毒疫苗，试验采用同源重组的方法构建MAP K-10ΔPanCD基因缺失菌株，以MAP K-10菌株基因组为模板，扩增PanCD基因的上下游同源臂，构建pHAE159-p0004s-PanCD重组质粒，转化入耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis,Msg）感受态细胞中获得噬菌体，并感染MAP K-10菌株，然后挑取单克隆扩大培养，提取基因组进行PCR鉴定；绘制MAP K-10菌株与MAP K-10ΔPanCD基因缺失菌株的生长曲线；用MAP K-10ΔPanCD基因缺失菌株感染小鼠并评价其毒力，解剖取肝脏和脾脏，分析组织荷菌量和肝脏病理变化。结果表明：成功扩增出PanCD基因的上下游同源臂，经PCR扩增和酶切鉴定成功构建出pHAE159-p0004s-PanCD重组质粒，将重组质粒电转化入Msg感受态细胞中获得噬菌体，感染MAP K-10菌株后成功构建出MAP K-10ΔPanCD基因缺失菌株；与MAP K-10菌株相比，MAP K-10ΔPanCD基因缺失菌株的生长速率明显下降；攻菌2周时，MAP K-10ΔPanCD基因缺失菌株感染小鼠的肝脏和脾脏中荷菌量显著减少；小鼠肝脏病变明显减轻。说明PanCD基因是MAP的一个重要毒力因子，构建的MAP K-10ΔPanCD基因缺失菌株可作为MAP减毒活疫苗的候选菌株。