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新型鸭呼肠孤病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

作者： 张博 1 ; 陈立功 2 ; 武华 1 ; 阴雅洁 1 ; 孟利佳 1 ; 郭康康 1 ; 侯绍华 3 ; 董世山 2 ;

作者机构： 1.河北农业大学

2.河北农业大学动物医学院

3.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

关键词： 新型鸭呼肠孤病毒;σB基因;荧光定量;RT-PCR;TaqMan探针;应用

期刊名称： 河北农业大学学报

ISSN： 1000-1573

年卷期： 2020 年 005 期

页码： 80-84

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了快速、准确检测新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV),本试验采用NDRVσB基因的序列保守区,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了NDRV实时荧光定量RT-PCR检测方法标准曲线,并进行特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测试验.结果表明:所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法标准曲线方程为y=-3.354x+44.818,扩增效率为98.7%,标准曲线的相关系数为0.999;该方法可以特异性检测NDRV,但对MDRV、ARV、TMUV、DHAV均无反应信号;该方法检测质粒标准品最低检测浓度为10拷贝/μL,是普通PCR方法检测敏感性的1 000倍;该方法的组内与组间变异系数均小于2%;用该方法检测临床样品,结果显示NDRV阳性率为45%,而常规RT-PCR阳性率为33%,比常规RT-PCR敏感.说明本研究建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法可为NDRV的监测和早期诊断提供可靠的技术支撑.

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