文献类型： 中文期刊

作者： 周悦 ¹ ; 程溪柳 ² ; 高英 ² ; 孙莹璐 ² ; 王欢 ³ ; 刘君 ² ; 白江平 ¹ ;

作者机构： 1.甘肃农业大学农学院/甘肃省干旱生境作物学重点实验室/甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室

2.中国农业科学院作物科学研究所

3.中国农业科学院生物技术研究所

关键词： 高通量;磁珠法;DNA提取;NGS

期刊名称： 植物遗传资源学报

ISSN： 1672-1810

年卷期： 2022 年 004 期

页码： 1224-1232

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 大规模高质量基因组DNA的提取是植物分子生物学研究的基础，是作物种质资源鉴定、重要农艺性状调控基因的正向定位克隆、作物基因组标记分子辅助育种的重要技术环节。然而，目前常规的单管离心法效率不能满足大规模提取需要，整板离心法及全自动高通量核酸提取仪对设备和耗材要求较高，实验室常用的传统离心方法步骤较为繁琐，涉及较多有机溶剂，耗时较长，成本较高，不太适用于大批量植物材料。为了满足一般实验室大规模、低成本、高质量DNA提取的需求，我们开发了一套半自动DNA提取仪、配套耗材和钢珠分样器，并开发相应DNA提取流程和试剂。应用高通量、高效率的磁珠法吸附DNA，目的是建立简化、快速、高效且安全的植物组织基因组DNA提取方法。通过对小麦、水稻、玉米等主粮作物，以及部分种类的杂粮、油料、蔬菜等植物组织进行DNA提取，并用琼脂糖凝胶电泳、Qubit等方法对DNA完整性和纯度检测，结果表明：（1）磁珠法提取的植物基因组DNA质量与纯度高、完整性好、无降解且无盐离子、有机物等污染；（2）提取过程无需反复对每个样品进行标注，试剂少、步骤少、操作简单快速且成本低，平均每人每天可提取2000个样品；（3）所得DNA样本可应用于基因克隆，转基因检测、CRISPR编辑检测等多种分子实验，也可用于多种NGS（Next Generation Sequencing）建库的高通量深度测序检测。因此，基于磁珠法的DNA纯化方案为植物研究提取DNA提供了一种简单、高效且经济的方法。