文献类型： 中文期刊

作者： 栾慧 ¹ ; 龚俊 ¹ ; 赵馨雨 ¹ ; 危艳武 ¹ ; 李刚 ¹ ; 刘长明 ¹ ; 刘思国 ¹ ; 张万江 ¹ ; 王春来 ¹ ;

作者机构： 1.兽医生物技术国家重点实验室

关键词： PCV2;副猪嗜血杆菌;亚单位疫苗;小鼠免疫效果

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2023 年 001 期

页码： 65-71

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为评价猪圆环病毒2型-副猪嗜血杆菌二联亚单位疫苗（以下简称二联苗）对小鼠的免疫保护效果，本研究将猪圆环病毒2型（PCV2） cap基因克隆至p MAL-c5X载体中，并通过原核系统表达了重组Cap蛋白（rCap）。通过western blot检测显示原核表达的r Cap与PCV2单克隆抗体发生特异性结合，表明r Cap具有良好的反应原性。利用本研究室已经纯化并保存的副猪嗜血杆菌（HPS）重组蛋白r Cdt B、r Afua和r OPPA，与r Cap蛋白以及佐剂ISA201VG混合乳化后制成PCV2-HPS二联亚单位疫苗，疫苗中各蛋白（rCdtB、r Afua、r OPPA、r Cap）浓度均为50μg/300μL。将60只6周龄BALB/c小鼠随机均分成免疫组和对照组，采用背部多点注射方式免疫，首免后间隔14 d二免。一免后以及二免后的14 d分别通过颌下采血方法采血，通过间接ELISA方法检测各组小鼠血清中的特异性抗体，结果显示，二免后14 d，免疫组小鼠血清中CdtB、OPPA、Afua抗体水平分别与PBS+ISA201VG对照组和免疫之前比较均极显著提高（P＜0.0001）；利用PCV2免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）抗体检测试剂盒检测各组小鼠血清抗体，结果显示在攻毒前PBS组均未检测到PCV2抗体，免疫组二免后14 d抗体水平为1∶800。二免后14 d，将免疫组和PBS组各随机分为3组（每组10只小鼠）进行攻毒保护试验，结果显示二联苗对PCV2攻毒组小鼠的免疫保护率为80%，对HPS5型HN10株攻毒组小鼠的免疫保护率为70%，与对照组比较差异极显著（P＜0.01）；对HPS13型ZD12株攻毒组小鼠的免疫保护率为80%，与对照组比较差异极显著（P＜0.001）。上述结果首次表明，原核表达的r Cap具有良好的免疫原性，PCV2-HPS二联亚单位疫苗对小鼠具有一定的保护效果，为后续PCV2-HPS二联亚单位疫苗的研究奠定了实验基础。