文献类型： 中文期刊

作者： 冯书堂 ¹ ; 丛笑倩 ² ; 刘立新 ² ; 李秀兰 ² ; 董晓 ² ; 包林平 ² ; 张莉 ² ; 陈红平 ² ; 牟玉莲 ² ; 况玲 ² ; 张青峰 ² ; 姚錱 ² ;

作者机构： 1.中国农业科学院畜牧研究所

2.中国农业科学院畜牧研究所,中国科学院生化细胞研究所,中国农业科学院畜牧研究所,中国科学院生化细胞研究所,上海200031,中国农业科学院畜牧研究所,中国科学院生化细胞研究所,中国农业科学院畜牧研究所,中国农业科学院畜牧研究所,中国农业科学院畜牧研究所,中国农业科学院畜牧研究所,中国农业科学院畜牧研究所,中国科学院生化细胞研究所 北京100094,上海200031,北京100094,北京100094,上海200031,北京100094,北京100094,北京100094,北京100094,北京100094,上海200031

关键词： 嵌合体;囊胚;近交系猪;原始生殖嵴细胞

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2005 年 36 卷 03 期

页码： 311-312

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采集25~28日龄的五指山小型猪(WZSP)胚胎原始生殖嵴细胞(PGCs),用于 WZSP生殖细胞(EG)建系培养技术研究。研究发现:以DMEM含15%胎牛血清、0 1 mol/L巯基乙醇等为基础培养液,分别添加生长因子20 ng/mL LIF、40 ng/mL hSCF、20 ng/mL hbFGF,以STO为饲养层,进行 EG培养建系,WZSP 3 d 可出现克隆,其克隆具有出现早,生长数量多,增殖快,成熟亦早,传代率高的特点。培养 7~10 d需传代或冷冻保存。EG类细胞冷冻、解冻后尚可复苏,并传至11代。若基础培养液不添加生长因子,培养 6~10 d后亦可出现 EG克隆细胞株,但其克隆具有出现晚、数量少、增殖慢等特点。研究中还发现25~26日龄的WZSP胚胎的原始生殖嵴小、不易观察、PGCs分离较困难; 27 ~ 28 日龄的 WZSP 胚胎的原始生殖嵴体积大、易观察、便于分离并可获得多量的PGCs。同时对PGCs进行了形态学、体外分化、AKP染色鉴定等研究。2002 年 9-12 月,在中国农业科学院畜牧研究所五指山猪保种场先后从22头超排处理的大白猪供体中,于配种后(当天为 0 d)5 5~7 d实施手术法获得252枚可用胚。将123枚胚胎显微注射WZSP的EG细胞,每枚注射5~15个细胞,与未注射的 103 枚混合分别移植给9头受体,平均每头受体移植胚胎25 11±5 11枚、含注射 EG细胞胚胎 13 67±3 57 枚,其中 7 头分别