文献类型： 会议论文
第一作者： LU Guo-tao
作者： LU Guo-tao 1 ; 鲁国涛 1 ; ZHANG Zi-bo 1 ; 张子博 1 ; TIAN LU 2 ;
作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室,黑龙江哈尔滨150069
2.中国
关键词： 家鸡;DDX21基因;基因编辑;生物学功能
会议名称： 第九届北京实验动物科学国际论坛
主办单位： 中国实验动物学会`北京实验动物学学会`北京市实验动物管理办公室
页码： 00000385-00000393
摘要： 目的:旨在建立一种简单、快捷、高效、稳定的家鸡基因组编辑系统,为研究基因功能及模型建立奠定基础. 方法:根据鸡DDX21基因序列设计选择4个gRNA,构建Cpf1/gRNA敲除表达载体并转染状态良好的DF-1细胞,经流式细胞仪收集表达红色荧光蛋白的阳性细胞,T7E1酶切法选择高效的敲除载体,TA克隆测序法评估其介导DDX21基因敲除的效率. 结果:结果表明4个gRNA序列正确插入表达载体中;T7E1酶切结果显示Cpf1/gRNA1基因靶向敲除活性最高,TA测序分析发现其敲除活性为33.3％. 结论:本研究初步建立了CRISPR/Cpf1系统介导的基因编辑技术,结果表明CRISPR/Cpf1能够稳定介导鸡DF-1细胞上的基因组编辑,这为进一步揭示DDX21基因功能、建立DDX21基因敲除的细胞系和鸡体模型提供了理论基础和科学依据.
分类号： S831.2
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