文献类型： 会议论文
第一作者： LU Guo-tao
作者： LU Guo-tao 1 ; 鲁国涛 1 ; WANG Hui 1 ; 王辉 1 ; ZENG Wei-jun 2 ;
作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室 哈尔滨150069
2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生
关键词： 禽流感病毒;DDX21基因;基因编辑;生物学功能
会议名称： 第九届北京实验动物科学国际论坛
主办单位： 中国实验动物学会`北京实验动物学学会`北京市实验动物管理办公室
页码： 00000372-00000384
摘要： 利用CRISPR/Cpf1基因编辑技术构建DDX21基因稳定敲除的细胞株,并检测其生物学功能.设计、构建靶向DDX21基因向导RNA表达载体,与Cpf1表达载体共转染HEK293细胞,通过流式筛选、基因测序、Western印迹、细胞增殖能力检测鉴定细胞株;荧光定量PCR检测病毒感染后模式识别受体(TLR-3、TLR-7、MDA-5)、Ⅰ型干扰素、IL-6以及抗病毒蛋白OAS mRNA水平表达情况.结果显示:成功筛选到两株DDX21基因敲除的细胞株,蛋白免疫印迹显示DDX21蛋白不表达;与野生型(Wildtype,WT)相比形成细胞单层的时间明显延长(P＜0.01);H9N2亚型禽流感病毒感染实验表明:模式识别受体TLR-3、MDA-5的mRNA表达水平上调,TLR-7表达水平无明显差异,IFN-α、IFN-β、IL-6及抗病毒蛋白OAS的mRNA表达水平下调,表明DDX21基因敲除阻断了DDX21-TRIF-MyD88信号通路;TCID50测定结果显示,差异最高可达到WT的3.01倍,表明DDX21基因敲除后流感病毒复制增加.本研究利用CRISPR/Cpf1系统获得两株DDX21基因稳定敲除的HEK293细胞株,为深入研究DDX21基因功能、病毒感染的天然免疫应答和调控研究奠定了基础.
分类号： R373.13
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