文献类型： 中文期刊

作者： 史鑫琪 ¹ ; 季朝阳 ² ; 陈晓彤 ¹ ; 张子博 ¹ ; 张鑫 ² ; 郭慧娟 ¹ ; 田璐 ¹ ; 王洪峰 ³ ; 陈洪岩 ¹ ; 王靖飞 ⁴ ; 冯力 ² ; 夏长友 ¹ ; 孟庆文 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学创新团队/国家禽类实验动物资源库

2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道传染病创新团队

3.哈尔滨维科生物技术开发公司

4.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原与病理形态学创新团队

关键词： 猪氨基肽酶N;猪传染性胃肠炎病毒;CRISPR/Cas9;ST细胞

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2023 年 001 期

页码： 1-8

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究与猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）结合的猪氨基肽酶N （pAPN）受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响，本研究检索并分析p APN与TGEV的结合位点，结果显示，敲除p APN aa668～aa963对其酶活性无影响。因此，利用CRISPR/Cas9技术构建p APN与TGEV结合位点敲除细胞系，经PCR和western blot鉴定结果显示，正确构建一株敲除p APN aa668～aa963的ST细胞系，即敲除p APN 15-21外显子，命名为KO-ST-15。采用CCK-8和细胞划痕方法检测KO-ST-15细胞的增殖和细胞迁移活性，结果显示，敲除p APN 15-21外显子对ST细胞增殖和迁移活性均无显著影响。利用RT-q PCR和IFA检测KO-ST-15感染TGEV后病毒复制拷贝数和N蛋白的表达，结果显示，敲除p APN 15-21外显子可极显著抑制TGEV在ST细胞系中的复制（P＜0.001）。利用RT-q PCR检测KO-ST-15感染TGEV后炎症相关基因转录水平变化，结果显示，TGEV感染后KO-ST-15中的IL-6、IL-8和NLRP3 （NOD-like receptor protein 3） m RNA转录水平无显著变化，但RIG-I和MDA5的转录水平显著上调（P＜0.05）。上述结果首次表明，敲除p APN15-21外显子能够极显著抑制TGEV在ST细胞中的复制，但细胞KO-ST-15的正常生理功能无变化，TGEV不能进入敲除p APN 15-21外显子的细胞中引起炎症反应，该结果为进一步培育抗病育种猪提供参考依据和候选方案。