文献类型： 中文期刊

作者： 隋红 ¹ ; 李曦 ² ; 张永欣 ² ; 肖晶 ² ; 符芳 ² ; 李乐静 ¹ ; 白玉贤 ¹ ;

作者机构： 1.哈尔滨医科大学附属肿瘤医院

2.中国农业科学院

关键词： 新城疫病毒;血凝素神经氨酸酶;细胞定位;质粒构建

期刊名称： 国际免疫学杂志

ISSN： 1673-4394

年卷期： 2009 年 32 卷 004 期

页码： 258-262

收录情况： 北大核心

摘要： 目的 构建定位表达于细胞不同部位的新城疫病毒HN(HEMAGGLUTININ-NEURAMINIDASE)基因.方法 应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以新城疫病毒D90株RNA为模板,分别扩增出含有HN基因全长和不含终止子的HN基因片段,将克隆的HN基因片段经双酶切后定向插入真核表达质粒PCDNA3.1(+)中,经过定向插入组织凝血酶原激活物(TPA)的前导序列和/或A型流感病毒血凝素(HA)基因跨膜区(TM)片段进行修饰分别构建胞浆型、跨模型和分泌型DNA质粒.结果 所有重组质粒经酶切和测序鉴定插入正确.经过体外转染真核细胞,间接免疫荧光和SDS-PAGE蛋白质电泳检测,证明构建的新城疫病毒HN基因定位表达于真核细胞的胞浆、胞膜和细胞外.结论 成功构建了定位DOI:10.3760/CMA.J.ISSN.1673-4394.2009.04.003作者单位:150040,哈尔滨医科大学附属肿瘤医院内科(隋红,李乐静,白玉贤);150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪病研究室(李曦,张永欣,肖晶,符芳)通信作者:李曦,E-MAIL:LX2005@126.COM表达于细胞不同部位的HN蛋白的DNA质粒即胞浆型、跨模型和分泌型.