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水稻CRISPR/Cas12a系统的优化及其介导的腺嘌呤碱基编辑器的建立

文献类型: 中文期刊

作者: 王敬文 1 ; 严芳 1 ; 柳浪 1 ; 周雪平 2 ; 王道文 3 ; 周焕斌 2 ;

作者机构: 1.植物病虫害生物学国家重点实验室

2.中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室

3.中国科学院遗传与发育生物学研究所植物细胞与染色体工程国家重点实验室

关键词: CRISPR;Cas12a;腺嘌呤碱基编辑器;水稻

期刊名称: 生物技术通报

ISSN:

年卷期: 2021 年 006 期

页码: 279-285

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 为了构建高效的CRISPR/Cas12a介导的水稻基因编辑系统,通过测试不同来源的Cas12a蛋白、crRNA长度和构型来探索影响Cas12a编辑活性的因素发现,相对于AsCas12a和LbCas12a在crRNA为23 nt时具有更高的编辑效率,并且crRNA 3’端的U4AU4结构并不能增强其在水稻中的编辑活性,同时利用大肠杆菌腺嘌呤脱氨酶变体TadA8e开发了CRISPR/LbCas12a介导的腺嘌呤碱基编辑系统pUbi∶rBE58,成功地将水稻内源基因OsCPK15实现A到G替换(A>G),其效率为33.33%。本研究证明了利用CRISPR/Cas12a可以对水稻基因组进行编辑,丰富了水稻基因编辑工具,拓宽了基因编辑工具箱。

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