文献类型： 中文期刊

作者： 张玉哲 ¹ ; 任善会 ² ; 姚威 ³ ; 龚真莉 ² ; 张红强 ¹ ; 柳民意 ¹ ; 尤婷 ¹ ; 王相伟 ² ; 李积雲 ⁴ ; 殷相平 ² ; 孙跃峰 ² ; 陈豪泰 ² ; 万学瑞 ¹ ;

作者机构： 1.甘肃农业大学

2.中国农业科学院兰州兽医研究所

3.重庆市万州区畜牧产业发展中心

4.青海省科学技术信息研究所

关键词： 牛结节性皮肤病病毒;TK基因;Cre/LoxP系统;重组毒株

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年 55 卷 010 期

页码： 4517-4529

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用同源重组技术及Cre-LoxP系统平台，构建牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)缺失TK基因毒株，为研制出安全、高效的LSDV基因工程疫苗提供备选毒株。以TK基因为靶基因，利用Cre-LoxP系统平台，红色荧光蛋白(RFP)为筛选标记，采用重叠PCR方法扩增左、右同源臂以及RFP基因表达框并进行融合，将其克隆至pUC19T载体，构建基因缺失转移载体pUC19T-LSDV-ΔTK-RFP。将转移载体重组质粒转染至Vero细胞，并感染LSDV/CHA/FJ/2021毒株，构建LSDV-ΔTK-RFP重组病毒。采取蚀斑法、有限稀释法纯化LSDV-ΔTK-RFP。然后，利用Cre-LoxP系统，在MDBK-Cre细胞中从病毒基因组中切除RFP标签，采取蚀斑法和有限稀释法筛选并纯化LSDV-ΔTK毒株。利用PCR及测序方法对重组毒株进行鉴定，并测定其一步生长曲线。结果表明成功构建缺失TK基因的重组毒株(LSDV-ΔTK),重组毒株复制力略低于野生毒株。应用Cre-LoxP系统构建的缺失TK基因LSDV毒株，具有良好的遗传稳定性和复制生长特性，为后续LSDV基因工程疫苗的研制提供了候选毒株，同时拓展了Cre-LoxP系统的应用范围。