文献类型： 中文期刊
作者： 朱学亮 1 ; 赵志荀 2 ; 蒙学莲 2 ; 曾巧英 1 ;
作者机构： 1.甘肃农业大学动物医学院
2.家畜疫病病原生物学国家重点实验室
关键词： 绵羊痘病毒;A11R基因;密码子优化;诱导表达;ELISA方法
期刊名称： 中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2022 年 52 卷 008 期
页码： 978-984
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 本研究旨在对免疫原性目的蛋白基因A11R优化表达的基础上建立羊痘血清学检测方法,为羊痘防控提供技术支撑.绵羊痘病毒A11R基因经密码子优化后合成目的基因,连入pET-28a(+)载体,并转化至BL21(DE3)大肠杆菌,pET28a-A11R经鉴定后进行诱导表达.结果显示,经密码子优化后的A11R蛋白的表达量显著增加,更易从转化的大肠杆菌裂解上清液和经过复性的包涵体中大量纯化获得.将该蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立检测羊痘抗体的间接ELISA方法,并进行特异性和敏感性试验,用该方法与商业化试剂盒对临床样品进行检测.结果显示,A11R蛋白的最佳包被剂量为0.5 μg/孔,待检血清最适稀释度为1∶100,家兔抗羊IgG最适稀释度为1∶20 000.用建立的间接ELISA方法检测小反刍兽疫、羊口疮、口蹄疫的阳性血清,结果均为阴性,无交叉反应,具有良好的特异性.当羊痘阳性血清稀释到1∶1 600时抗体检测仍为阳性,具有较高的敏感性.用该ELISA方法与商业化试剂盒检测临床样品,符合率为98.71%,具有良好的一致性.上述结果表明,本研究建立了基于A11R蛋白的羊痘血清学免疫诊断方法,同时表明了密码子偏好性的优化可显著提高蛋白表达量.
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