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非洲猪瘟病毒pE199L蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 张亮 1 ; 张越 2 ; 安芳兰 1 ; 杨进才 1 ;

作者机构： 1.中农威特生物科技股份有限公司

2.中国农业科学院兰州兽医研究所

关键词： 非洲猪瘟;pE199L蛋白;原核表达;免疫原性

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年 55 卷 011 期

页码： 1509-1516

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在利用大肠杆菌表达系统制备非洲猪瘟病毒（ASFV）囊膜蛋白pE199L，并评估其免疫原性。将优化后的p E199L蛋白的基因克隆至pET-32a载体，重组质粒经大肠杆菌诱导表达后通过亲和层析纯化，并进行Western-blot鉴定其特异性。将纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体，通过间接ELISA和细胞间接免疫荧光分别检测血清抗体效价及特异性，最后通过ASFV复制抑制试验测定免疫血清的抗病毒活性。结果显示，成功制备了ASFV pE199L蛋白，免疫小鼠后第28天血清抗体效价达1∶128 000，该血清可与感染ASFV的猪骨髓巨噬细胞发生特异性免疫结合。流式细胞术检测表明，免疫后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞显著活化，血清中IFN-γ和IL-4细胞因子的含量均显著上升。病毒复制抑制试验显示，pE199L蛋白诱导的抗体可有效抑制ASFV复制。综上所述，pE199L蛋白具有良好免疫原性，为ASFV亚单位疫苗研发提供了重要候选抗原。

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