文献类型： 中文期刊

作者： 张越 ¹ ; 茹毅 ² ; 郝荣增 ² ; 杨锐 ² ; 赵陇和 ² ; 李亚军 ² ; 杨洋 ² ; 张荣 ² ; 蒋成辉 ² ; 郑海学 ² ;

作者机构： 1.中国农业科学院兰州兽医研究所

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关键词： 非洲猪瘟病毒(ASFV);H108R蛋白;多克隆抗体;免疫原性

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2025 年 56 卷 003 期

页码： 1344-1354

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在制备ASFV H108R蛋白，通过免疫小鼠评价该蛋白的免疫原性，为该蛋白作为疫苗候选抗原的研究提供理论依据。利用生物信息学工具分析H108R蛋白的结构及基本理化性质，选择编码蛋白33～108 AA的基因序列串联融合到原核表达载体，转化后经IPTG诱导表达，用镍亲和层析纯化目标蛋白质。免疫小鼠利用流式细胞术检测脾脏活化的CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞，分离小鼠血清测定特异性抗体滴度，利用Western blot和IFA鉴定多克隆抗体的特异性。并用试剂盒检测血清中细胞因子含量，将血清与ASFV-GFP病毒孵育评估抗体是否能抑制病毒的复制。生物信息学分析表明H108R蛋白为亲水性蛋白质，有跨膜区，无信号肽，蛋白二三级结构中存在较多α-螺旋。SDS-PAGE、Western blot显示IPTG诱导后，成功表达纯化H108R蛋白。蛋白免疫小鼠后能够诱导小鼠脾脏T细胞的活化，刺激机体产生更高水平的细胞因子。免疫制备的多克隆抗体效价为1∶128 000,能与ASFV-GFP病毒特异性结合，与病毒孵育后能明显抑制病毒的复制。本研究成功表达制备了ASFV H108R蛋白，免疫能够诱导脾脏T淋巴细胞活化，引起细胞因子水平升高，制备的多克隆抗体能够明显抑制病毒的复制，具有较好的免疫原性，为深入研究H108R蛋白的生物学功能及疫苗研究奠定基础。