文献类型： 中文期刊

作者： 尤婷 ¹ ; 任善会 ² ; 王萌 ¹ ; 张红强 ¹ ; 高小龙 ³ ; 姚威 ⁴ ; 王卉 ¹ ; 杨雪 ¹ ; 马春玲 ² ; 柳民意 ¹ ; 张玉哲 ¹ ; 王金龙 ¹ ; 孙跃峰 ² ; 陈豪泰 ² ; 王桂荣 ¹ ;

作者机构： 1.甘肃农业大学

2.中国农业科学院兰州兽医研究所

3.青海大学动物科技学院

4.重庆市万州区畜牧产业发展中心

关键词： 羊口疮病毒;ORF112基因;同源重组;基因缺失

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年 55 卷 011 期

页码： 5200-5210

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用同源重组技术构建羊口疮病毒(orf virus, ORFV)ORF112基因缺失毒株，为后续研制出高效、安全的ORFV基因工程疫苗提供候选毒株。以ORF112基因为靶基因，通过重叠PCR的方法将左、右同源臂及绿色荧光蛋白(EGFP)基因表达框，进行融合后与pUC19T载体连接，构建出pUC19T-ORFV-ΔORF112-EGFP基因转移载体。将转移载体重组质粒转染到Vero细胞与WT-ORFV基因组进行同源重组。采取有限稀释法和挑取单细胞克隆法，筛选并纯化出纯合的ORFV-ΔORF112-EGFP毒株，并对该基因缺失毒株遗传稳定性和增殖特性等进行研究。结果显示：利用有限稀释和挑取单细胞克隆方法，进行阳性重组病毒纯化，通过PCR验证和测序，成功地获得ORFV-ΔORF112-EGFP重组毒株。该重组毒株在系列传代过程中EGFP稳定表达且无减弱现象。该重组ORFV-ΔORF112-EGFP毒株与野生毒株的复制生长特性基本一致。成功构建并筛选得到纯化的ORFV-ΔORF112-EGFP基因缺失毒株，该毒株具有良好的遗传稳定性和复制能力，为后续ORFV基因工程疫苗的研制提供了候选毒株。