文献类型： 中文期刊
作者： 李文清 1 ; 王加启 2 ; 南雪梅 3 ; 卜登攀 4 ;
作者机构： 1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室
2.河南农业大学生命科学学院
3.CAAS-ICRAF农用林业与可持续畜牧业联合实验室
4.东北农业大学食品安全与营养协同创新中心
关键词： 原代细胞培养;乳腺上皮细胞;激素;β-酪蛋白mRNA
期刊名称： 动物营养学报
ISSN： 1006-267X
年卷期： 2014 年 26 卷 09 期
页码： 171-178
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 本试验旨在建立一种高效的奶牛乳腺上皮细胞培养方法,并研究不同激素和细胞因子对其表达β-酪蛋白mRNA的诱导作用。分别采用组织块培养法和机械破碎法培养奶牛乳腺上皮细胞,利用成纤维细胞和乳腺上皮细胞对胰酶的敏感性不同,对获得的细胞进行纯化。通过细胞计数法测定纯化细胞的生长曲线,通过免疫荧光组织化学染色法检测角蛋白18的表达,通过实时定量PCR法检测8种不同激素和细胞因子组合培养液诱导细胞表达β-酪蛋白mRNA的效果。结果表明:通过机械破碎法可以分离得到增殖旺盛的奶牛乳腺上皮细胞,与组织块培养法相比,具有细胞迁出速度快等优点。细胞生长曲线呈典型的"S"型。在纯化的乳腺上皮细胞及第20代乳腺上皮细胞中都检测到角蛋白18的表达。100 ng/mL类胰岛素生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)显著提高了乳腺上皮细胞中β-酪蛋白mRNA的表达(P<0.05)。由结果可知,本试验采用的机械破碎法是一种高效的奶牛乳腺上皮细胞培养方法,100 ng/mL IGF-Ⅰ对细胞中β-酪蛋白mRNA表达的诱导效果最好。
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