您好，欢迎访问中国农业科学院 机构知识库！

全部

  • 全部
  • 标题
  • 学者
  • 机构
  • 关键词

稳定表达Cas9蛋白的C2C12细胞株构建

文献类型： 中文期刊

作者： 刘玮玮 1 ; 王伟 2 ; 杨小淦 1 ; 唐中林 1 ;

作者机构： 1.广西大学动物科学技术学院

2.中国农业科学院深圳农业基因组研究所

关键词： CRISPR/Cas9;C2C12细胞株;慢病毒包装体系;基因编辑

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2024 年 55 卷 010 期

页码： 3169-3178

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】优化慢病毒包装体系并建立能稳定表达Cas9蛋白的小鼠成肌细胞系（C2C12），为基因编辑技术研究提供细胞模型和理论参考。【方法】以C2C12细胞为研究对象，设对照组和试验组，调整三质粒（pmd2.g、pspax2和Cas9）用量配比以优化慢病毒包装体系。利用优化后的慢病毒包装体系将表达Cas9蛋白的质粒（lenti-Cas9-puro和lenti-Cas9-Blast）包装成慢病毒感染C2C12细胞。采用药物筛选富集和单克隆分选获得稳定表达Cas9蛋白的C2C12单克隆细胞株。利用基因组鉴定、免疫荧光染色、sgRNA检测等试验验证细胞株构建情况。【结果】慢病毒包装体系优化后，试验组质粒转染效率达90%以上，极显著高于对照组（80%)(P<0.01）；试验组慢病毒滴度提高至1.8×10～7 TU/mL，极显著高于对照组（6.2×10～6 TU/mL)(P<0.001）。PCR结果显示，C2C12-Cas9稳转细胞株成功扩增出Cas9、puro和BSD序列，外源Cas9序列成功整合到C2C12细胞基因组中，而野生型的C2C12细胞不存在Cas9序列。免疫荧光染色结果表明，C2C12-Cas9稳转细胞株能表达Cas9蛋白。T7E1酶切和Sanger测序结果表明，整合的Cas9蛋白具有切割活性。【结论】通过调整三质粒用量配比成功优化慢病毒包装体系，提高质粒转染效率和慢病毒滴度。成功构建能稳定表达Cas9蛋白的C2C12细胞株，建立了构建稳转细胞株的相对成熟体系。

  • 相关文献

[1]基于pLYCRISPR/Cas9-Mtdi载体系统的棉花多位点基因编辑研究. MKULAMA Mtawa Andrew Prosper. 2016

[2]CRISPR/Cas9系统在作物基因组编辑中的研究进展. 高丽,渠晖,王丽华,刘言龙,李艳阳,詹秋文,李杰勤. 2018

[3]CRISPR/Cas9技术及其在猪基因编辑中的应用. 刘思远,卢丹,唐中林. 2020

[4]花粉管通道和农杆菌介导的花生AhFatB基因编辑. 潘雷雷,纪红昌,黄建斌,淮东欣,雷永,隋炯明,唐艳艳,朱虹,姜德锋,王晶珊,乔利仙. 2020

[5]利用CRISPR/Cas9系统定向改良水稻粒长和穗粒数性状. 沈兰,李健,付亚萍,王俊杰,华宇峰. 2017

[6]利用CRISPR/Cas9技术对燕麦乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)基因的编辑. 于东洋,王凤梧,融晓萍,武志娟,王鑫,杨燕,韩冰,田青松. 2019

[7]CRISPR/Cas9技术编辑淀粉合成基因PUL. 奉宝兵,魏祥进,焦桂爱,胡时开,邬亚文,谢黎虹,圣忠华,邵高能,唐绍清. 2019

[8]基于CRISPR/Cas9技术的全基因组基因编辑MDCK细胞文库的构建. 朱媛媛,许榜丰,闫鸣昊,刘芹防,滕巧泱,苑纯秀,李雪松,李泽君. 2024

[9]Cas9蛋白变体VQR高效识别水稻NGAC前间区序列邻近基序. 辛高伟,胡熙璕,王克剑,王兴春. 2018

[10]基因编辑技术研究进展及其在苜蓿等豆科饲草作物中的应用. 刘欢,孟颖颖,牛丽芳,林浩. 2017

[11]不同Cas9启动子对大豆CRISPR/Cas9系统效率的作用分析. 牛志远,秦超,刘军,王海泽,李宏宇. 2023

[12]除草剂抗性农作物育种研究进展. 李燕敏,祁显涛,刘昌林,刘方,谢传晓. 2017

[13]CRISPR/Cas9系统构建的水稻OsPht基因突变体材料可用于养分转运评价. 韩娇,王莉,何蕊,李伟,王冰,黄升财,孙永伟,程宪国. 2017

[14]利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建TLR3敲除小鼠模型. 王伟,姜雪婷,庞中兵,孙海阳,陈洪岩,孟庆文. 2015

[15]利用CRISPR/Cas9技术缺失MDV分离株meq基因的研究. 张峰,于正浩,兰兴鸽,张艳萍,王永强,高立,高玉龙,李凯,祁小乐,崔红玉,潘青,王笑梅,刘长军. 2019

[16]CRISPR/Cas9系统介导基因组编辑的研究进展. 刘志国. 2014

[17]CRISPR/Cas9基因编辑技术在家畜育种新材料创制中的研究进展. 王欢,邹惠影,朱化彬,赵善江. 2021

[18]利用CRISPR/Cas9技术编辑OsOFP30基因创制水稻粒型突变体. 何勇,刘耀威,熊翔,祝丹晨,王爱群,马拉娜,王廷宝,张健,李建雄,田志宏. 2024

[19]利用CRISPR/Cas9技术创制糯稻种质. 陈峰,姜艳芳,焦晓真,张华,朱文银,姜明松,徐建第. 2023

[20]利用CRISPR/Cas9编辑草莓FvPDS基因的研究. 刘丽锋1,2,宋艳红1,2,赵霞1,李刚1,2,周厚成1. 2025

作者其他论文 更多>>
置顶
购物车
反馈

© 京ICP备09089781号-29 主办单位：中国农业科学院

学术资源： 中国农业科学院 农业专业知识服务系统 农科联盟资源共建共享平台 中国农业科技文献与信息服务平台 中国农业期刊集成服务平台