文献类型： 中文期刊
作者： 闫昭宇 1 ; 孔宁 2 ; 张琪 1 ; 许信刚 1 ; 单同领 2 ; 周宏超 1 ;
作者机构： 1.西北农林科技大学动物医学院
2.中国农业科学院上海兽医研究所
关键词： 单克隆抗体;原核表达;牛冠状病毒;N蛋白
期刊名称： 动物医学进展
ISSN： 1007-5038
年卷期： 2025 年 46 卷 011 期
页码： 44-49
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为了制备牛冠状病毒（Bovine coronavirus,BCoV）结构蛋白N的单克隆抗体，将N基因克隆到原核表达载体pCOLD I中，将构建好的重组质粒转化进大肠埃希氏菌BL21(DE3)中，诱导目的蛋白表达后纯化，用纯化的蛋白免疫小鼠制备杂交瘤细胞。对阳性杂交瘤细胞进行3次亚克隆后，用筛选鉴定正确的阳性杂交瘤细胞，腹腔注射小鼠制备腹水并进行初步纯化，利用Western blot检测腹水中抗体的特异性，利用间接免疫荧光试验（IFA）检测腹水中抗体的反应性。Western blot、IFA显示制备的腹水中抗体的特异性和反应性均良好。成功制备出一株能稳定分泌牛冠状病毒N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，为进一步研究牛冠状病毒和N蛋白的功能提供了材料。
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