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利用双标准曲线法检测刺萼龙葵SrDOG1基因的表达

文献类型： 中文期刊

作者： 赵丹丹 1 ; 黄红娟 1 ; 黄兆峰 1 ; 陈景超 1 ; 王慧敏 1 ; 张朝贤 1 ; 魏守辉 2 ;

作者机构： 1.;中国农业科学院植物保护研究所

2.;中国农业科学院植物保护研究所;

关键词： 双标准曲线法;刺萼龙葵;DOG1基因;相对定量;表达检测

期刊名称： 植物保护

ISSN： 0529-1542

年卷期： 2018 年 01 期

页码： 121-126

收录情况： CSCD

摘要： 双标准曲线法是基因表达定量研究中应用较广的一种相对定量检测方法。本研究结合绝对定量的原理,对传统双标准曲线法进行了改进。以刺萼龙葵延迟萌发基因DELAY OF GERMINATION 1(DOG1)的表达检测为例,选择β-actin为内参基因,分别将目的基因和内参基因片段插入pEASY-Blunt Zero载体,制作标准质粒。提取冷藏或常温储藏种子的RNA进行荧光扩增,同时将标准质粒梯度稀释液作为模板构建标准曲线,以此计算SrDOG1的相对表达量。结果表明,双标准曲线法能够灵敏地检测SrDOG1基因的差异表达,发现冷藏种子中SrDOG1基因的表达量较常温储藏显著增高。双标准曲线法检测结果稳定,重现性好,数据处理简单,适用于多种条件下基因表达水平的比较,为进一步系统研究刺萼龙葵DOG1基因的表达特性和基因功能奠定了基础。

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