文献类型： 中文期刊

作者： 鄢胜飞 ¹ ; 张秀芳 ² ; 黄玥萌 ² ; 郑海英 ² ; 杨春艳 ² ; 覃广胜 ² ; 黄加祥 ² ; 尚江华 ³ ;

作者机构： 1.中国农业科学院广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室

2.;中国农业科学院广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室

3.;中国农业科学院广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室;

关键词： 水牛;Smad4基因;克隆;真核表达载体

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2017 年 08 期

页码： 2369-2377

收录情况： 北大核心

摘要： 为了阐明Smad4基因在水牛卵巢颗粒细胞增殖及胚胎发育中的分子机制,试验采用RT-PCR扩增并克隆水牛Smad4基因,对其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,构建Smad4基因的真核表达载体,通过脂质体转染法转染体外培养的牛卵巢颗粒细胞。结果表明,试验克隆得到水牛Smad4基因编码序列,编码区全长为1 662bp,编码553个氨基酸。通过BLAST对水牛Smad4基因的核苷酸序列进行同源性比对,结果显示,水牛Smad4基因与牛的同源性为99%,与绵羊、猪、马、人的同源性分别为98%、96%、96%和95%。系统进化树分析表明,Smad4基因在不同物种的进化过程中具有高度的保守性。试验成功构建了水牛Smad4基因的真核表达载体pEGFP-N1-Smad4,并在水牛卵巢颗粒细胞中表达出较强的绿色荧光蛋白Smad4-EGFP融合蛋白。本研究成功克隆了水牛Smad4基因,并成功构建了Smad4基因的真核表达载体,为进一步研究Smad4基因在水牛胚胎发育过程中的分子机制奠定基础。