文献类型： 中文期刊

作者： 严海璘 ¹ ; 朱宗财 ¹ ; 张王斌 ¹ ; 杜培秀 ² ; 张超 ² ; 赵文军 ³ ; 李为民 ² ;

作者机构： 1.塔里木大学植物科学学院

2.中国农业科学院生物技术研究所

3.中国检验检疫科学研究院

关键词： 梨火疫病菌;EAMY_3046;Sec依赖分泌蛋白;原核表达

期刊名称： 植物检疫

ISSN： 1005-2755

年卷期： 2020 年 04 期

页码： 1-6

收录情况： 北大核心

摘要： 梨火疫病菌(Erwinia amylovora)是我国进境植物检疫性有害生物,针对其开展病原生物学研究,以及建立准确、快速、灵敏的检测方法至关重要。本研究从梨火疫菌株DSM 17948克隆了EAMY_3046蛋白的编码基因Ea3046。该基因全长660 bp,编码220个氨基酸(amino acid,AA)。利用生物信息学与大肠杆菌碱性磷酸酯酶(alkaline phosphatase,PhoA)检测体系,明确EAMY_3046蛋白具有Sec依赖分泌特性,其N-端17个氨基酸为信号肽(signal peptide,SP),C-端为成熟蛋白,包含203个氨基酸,命名为mEa3046。将DSM 17948菌悬液接种梨幼果,分别在0、8、24 h取样,提取总RNA,进行实时荧光定量PCR分析,结果显示Ea3046在梨火疫病菌侵染寄主植物过程中表达量显著上升,在8 h和24 h分别上调2.27倍和1.68倍。此外,构建原核表达载体pET-mEa3046,导入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导16 h后,mEa3046在15℃条件下的表达量高于其在37℃的表达量,且蛋白以包涵体形式存在;利用Ni-IDA亲和层析纯化目标蛋白,经SDS-PAGE分析表明m Ea3046蛋白纯化成功。上述研究为EAMY_3046抗体制备奠定了基础。