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弓形虫酵母双杂交cDNA文库构建及与AMA1羧基端相互作用蛋白的筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 程子英 1 ; 高洋 2 ; 王铭 3 ; 郑君 4 ; 贾洪林 4 ; 赵权 1 ;

作者机构： 1.吉林农业大学动物科学技术学院

2.延边大学农学院动物医学系

3.东北农业大学动物医学院

4.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室-美国密西根州立大学天然免疫联合实验室

关键词： 弓形虫;AMA1羧基端;酵母双杂交;自激活

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2014 年 36 卷 03 期

页码： 201-204

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为筛选弓形虫AMA1基因羧基端(AMA1c)在弓形虫中的相互作用分子,本研究采用MatchmakerTM Gold酵母双杂交系统,构建了弓形虫RH株酵母双杂交cDNA文库,文库滴度达到4.26×107cfu/mL。以构建的pGBKT7-AMA1c诱饵质粒,使用PEG/LiAc法转化酵母菌株Y2H,利用表型筛选法检测AMA1c的自激活作用并进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆,根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证。结果表明,诱饵蛋白在酵母双杂交系统中具有无毒性和自激活作用,而且通过酵母双杂交筛选共得到13个与AMA1c蛋白相互作用的虫体蛋白。本研究结果为进一步研究AMA1c的功能奠定了基础。

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