文献类型： 中文期刊

作者： 苟好 ¹ ; 彭单伊 ¹ ; 刘姜 ¹ ; 吴羡 ¹ ; 邹琳 ¹ ; 符州 ¹ ;

作者机构： 1.重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆市干细胞治疗工程技术研究中心;重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心;重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心

关键词： 慢病毒载体;内皮细胞蛋白C受体;人脐带间充质干细胞;成纤维细胞

期刊名称： 重庆医科大学学报

ISSN： 0253-3626

年卷期： 2020 年 02 期

页码： 193-199

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:构建稳定敲低人内皮细胞蛋白C受体(endothelial cell protein C receptor,EPCR)的人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs),检测敲低EPCR对hUC-MSCs向成纤维细胞分化能力的影响。方法 :根据EPCR基因m RNA序列,合成3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)导入hUC-MSCs,通过检测EPCR蛋白表达筛选干扰效果最佳的siRNA。根据最佳siRNA序列构建慢病毒载体,包装重组慢病毒,感染hUC-MSCs,Real-time PCR和Western blot验证敲低效率。体外构建转化生长因子-β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)诱导hUC-MSCs向成纤维细胞分化模型,Real-time PCR和Western blot检测诱导前后α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,ColⅠ)表达水平,以反映诱导效果。结果:以EPCR最佳siRNA序列构建EPCR基因RNAi慢病毒载体,成功敲低hUC-MSCs内EPCR的mRNA(t=28.86,P=0.000)和蛋白(t=88.60,P=0.000)表达水平。EPCR敲低后,hUC-MSCs合成的COL1A1和COL1A2在m RNA(P=0.044,P=0.000)和蛋白(P=0.000,P=0.000)水平减少。体外TGF-β1诱导可增加hUC-MSCs内α-SMA(F=369.713,P=0.000;F=451.060,P=0.000)、COL1A1 (F=42.051,P=0.000;F=759.041,P=0.000)及COL1A2 (F=359.205,P=0.000;F=764.348,P=0.000)在mRNA和蛋白水平的表达,促进其向成纤维细胞分化。但敲低EPCR,α-SMA(P=0.002,P=0.002)、COL1A1(P=0.002,P=0.000)及COL1A2(P=0.000,P=0.000)在mRNA和蛋白的升高水平明显降低。结论:成功获得EPCR稳定敲低的hUC-MSCs,证实敲低EPCR可减少hUC-MSCs内ColⅠ表达,并减弱其向成纤维细胞分化的能力。