文献类型： 中文期刊

作者： 宫茂源 ¹ ; 傅国 ¹ ; 舒逸 ¹ ; 朱丹 ¹ ; 蒋婷婷 ¹ ; 王皓飚 ¹ ; 柳梓杨 ¹ ; 苏虹宇 ¹ ; 邹琳 ¹ ;

作者机构： 1.重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室国家儿童健康与疾病临床医学研究中心(重庆)儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆市干细胞治疗工程技术研究中心

关键词： T细胞分化;体外;胸腺类器官;缺刻基因1(NOTCH1)

期刊名称： 细胞与分子免疫学杂志

ISSN： 1007-8738

年卷期： 2021 年 37 卷 008 期

页码： 679-686

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 体外构建胸腺类器官,模拟胸腺组织三维结构,诱导多种来源小鼠造血干祖细胞(HSPC)向T细胞分化.方法 构建表达小鼠Delta样经典缺刻基因配体1(DLL1)及绿色荧光蛋白(GFP)的逆转录病毒载体;通过逆转录病毒感染OP9小鼠骨髓间充质细胞,构建OP9-DLL1细胞系;实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测OP9-DLL1细胞DLL1的mRNA和蛋白表达,免疫荧光细胞化学染色检测OP9-DLL1细胞DLL1的表达和分布;提取C57BL/6小鼠E13.5胎肝HSPC及骨髓HSPC,分别与OP9-DLL1细胞按适当比例混合后离心压实,置于气-液交面培养;利用荧光显微镜观察胸腺类器官生长,流式细胞术检测T细胞表面CD3、CD4、CD8、CD25、CD44、CD45、CD117、T细胞受体β(TCRβ)表达,免疫荧光组织化学染色观察造血细胞在胸腺类器官的分布.结果 成功构建表达小鼠DLL1及GFP的逆转录病毒载体,逆转录病毒感染OP9细胞后,通过GFP筛选获得OP9-DLL1细胞,OP9-DLL1细胞DLL1 mRNA和DLL1蛋白表达明显增加,DLL1蛋白表达于OP9-DLL1细胞膜.诱导培养40 d内,胸腺类器官状态良好且体积逐渐增大.胸腺类器官诱导T细胞程序性分化,HSPC分化为CD3+T细胞.结论 通过OP9-DLL1细胞成功构建胸腺类器官,体外诱导多种来源小鼠HSPC向T细胞分化.