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宿主细胞干扰素刺激基因15蛋白的真核表达及初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 王改丽 1 ; 王建科 1 ; 孙娜 1 ; 王超 1 ; 易立 1 ; 张淑琴 1 ; 程世鹏 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室;吉林省畜牧兽医科学研究院

关键词： 犬瘟热病毒;ISG15;真核表达;转染;蛋白表达

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2020 年 05 期

页码： 30-33+149

收录情况： 北大核心

摘要： 为了探究由干扰素刺激基因15(ISG15)编码产生的ISG15蛋白的表达特性,及其对犬瘟热病毒(CDV)感染过程的影响,以及在CDV致宿主免疫抑制过程中的作用,试验设计并合成了针对ISG15基因的特异性引物,提取宿主细胞总RNA,反转录成cDNA后利用RT-PCR方法扩增ISG15全基因序列,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测、回收纯化目的片段后将其插入到pEGFP-N1真核表达载体中,构建pEGFP-ISG15重组质粒。PCR和双酶切鉴定重组质粒后测序,将阳性重组质粒转染至HEK293T细胞中进行荧光显微镜观察和Western-blot分析。结果表明:经PCR扩增和双酶切鉴定得到与目的片段大小相符的片段,且测序结果证实重组质粒pEGFP-ISG15构建成功,转染HEK293T细胞24 h后可在荧光显微镜下观察到绿色荧光信号,Western-blot可检测到与目的蛋白大小一致的融合蛋白。说明试验构建的重组质粒pEGFP-ISG15可在体外成功表达ISG15蛋白。

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